技術 血液悪性腫瘍の治療

0001

関連出願の相互参照
本出願は、米国特許法第１１９条（ｅ）の下、２０１７年７月３１日に出願された米国仮特許出願第６２／５３９，１１４号、表題「Ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ ｆｏｒ ａ Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍａｌｉｇｎａｎｃｙ」の利益を主張するものであり、その内容は参照により本明細書に組み込まれる。
本発明は、ＣＤ３８抗原に特異的な放射標識モノクローナル抗体の組成物に関し、より具体的には、血液悪性腫瘍の治療に有用なα線放出核種で標識された抗ＣＤ３８モノクローナル抗体を含む組成物に関する。

0002

多発性骨髄腫は、通常は抗体の産生に寄与する形質細胞(plasma cell)の単一クローンの増殖によって特徴付けられる血液悪性腫瘍である。これらの悪性形質細胞（多発性骨髄腫細胞）は、骨髄中の健康な血液細胞を締め出し、末梢血中に循環し、骨髄の新しい部位に侵入する。したがって、多発性骨髄腫の進行は、骨髄と多発性骨髄腫細胞との間の連続的な相互作用によって起こり、骨格系全体に複数の腫瘍及び病変を生じさせ、生存期間中央値は５年である。全ての癌の約１％、及び全ての血液悪性腫瘍の１０％超が、多発性骨髄腫に起因し得る。多発性骨髄腫患者の大多数が数年以内に再発し、ほとんどの場合、再発患者は治療に反応しない。

0003

多発性骨髄腫の現在利用可能な治療は、化学療法、幹細胞移植、又は免疫調節薬（レナリドミド、サリドマイド）、プロテアソーム阻害剤（カルフィルゾミブ、ボルテゾミブ）、ビスホスホネート（パミドロン酸、ゾレドロン酸）等の小分子薬を含む。ビンクリスチン、カルムスチン、メルファラン、シクロホスファミド、アドリアマイシン、及びステロイド系薬剤、例えば、プレドニゾン又はデキサメタゾン等の化学療法剤の組み合わせを含む現在の治療プロトコルは、わずか約５％の完全寛解率、及び診断時から約３６〜４８ヶ月の生存期間中央値をもたらす。高用量の化学療法に続いて自己骨髄移植又は末梢血単核細胞移植を用いる最近の進歩により、完全寛解率及び寛解持続期間が増加した。しかしながら、全体的な生存期間はわずかに延長されたに過ぎず、治癒の証拠は得られていない。

0004

これらの利用可能な化学療法治療計画の有効性は、多発性骨髄腫細胞の低い増殖率及び多剤耐性の発生によって制限される。９０％を上回る多発性骨髄腫患者にとって、本疾患は化学療法抵抗性となる。結果として、形質細胞上の表面抗原を標的とする養子免疫療法を目的とした代替的な治療計画が求められている。

0005

多発性骨髄腫細胞は、長いＣ末端細胞外ドメインと短いＮ末端細胞質ドメインとを有する４５ｋＤのＩＩ型膜貫通糖タンパク質であるＣＤ３８を均一に過剰発現する。ＣＤ３８タンパク質は、ＮＡＤ+の環状ＡＤＰ−リボース（ｃＡＤＰＲ）への変換、及びｃＡＤＰＲのＡＤＰ−リボースへの変換を触媒することができる二官能性細胞外酵素であり、したがって細胞外ＮＡＤ+濃度を調節する。更に、ＣａｄＰＲは、細胞内Ｃａ2+動員のためのセカンドメッセンジャーであることが示されている。したがって、ＣＤ３８は、細胞内Ｃａ2+流束の調節に必要不可欠な構成要素であり得る。

0006

クラスとしてのＣＤ３８治療抗体は、典型的には、主な作用機序として古典的なＦｃ依存性免疫エフェクター機能、例えば、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）、及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）に依存するが、最近の研究により、免疫抑制因子の機序を標的とすることもまた、特定のＣＤ３８抗体の抗腫瘍活性に寄与し得ることが示されている。

0007

ＣＤ３８発現はまた、限定されないが、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病、Ｂ細胞急性リンパ性白血病、ワルデンストレーム高ガンマグロブリン血症、原発性全身性アミロイドーシス、マントル細胞リンパ腫、前リンパ球性白血病／骨髄性白血病、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、濾胞性リンパ腫、ＮＫ細胞白血病及び形質細胞性白血病を含む様々な他の悪性血液疾患においても上方制御される。

0008

更に、ＣＤ３８の発現は、前立腺の腺上皮、膵臓の島細胞、耳下腺を含む腺の導管上皮、気管支上皮細胞、精巣及び卵巣の細胞、ならびに直腸結腸腺癌の腫瘍上皮を含む、異なる起源の上皮／内皮細胞について記載されている。したがって、ＣＤ３８発現が関与する可能性がある疾患は、限定されないが、肺の気管支上皮癌腫、乳房の管及び小葉の上皮内層の悪性増殖から生じる乳癌、ｂ細胞から生じる膵腫瘍（例えば、インスリノーマ）、腸の上皮から生じる腫瘍（例えば、腺癌及び扁平上皮癌）を含む。

0009

ダラツムマブは、自家造血幹細胞移植を受けることができない、新たに診断された多発性骨髄腫（ＭＭ）患者の治療のための併用、ならびに再発性又は難治性ＭＭにおいて、単剤として及び標準治療との併用において承認された、ファーストインクラスのＣＤ３８を標的とする抗体である。抗ＣＤ３８単剤又は併用療法による患者の反応における顕著な改善にもかかわらず、全ての患者が反応するわけではなく、ＭＭの管理は依然として困難である。

0010

ＣＤ３８抗体療法に対する患者反応を潜在的に妨げる障害の１つは、上述の作用機序を誘導するために有意なＣＤ３８発現レベルを有する腫瘍に対するこのアプローチの依存性である。したがって、低い又は異種の腫瘍ＣＤ３８発現を有する患者は、抗体療法に対する反応が不十分な傾向がある。細胞傷害性毒素又は化学療法剤を抗体にコンジュゲートさせる抗体−薬物コンジュゲート等の薬物の治療指数を増加させるための選択肢もまた、強力な腫瘍細胞死を可能にするのに十分なペイロードを送達するための高い抗原密度に大きく依存する。したがって、低ＣＤ３８発現の状況において潜在的に作用し得る治療が求められており、抗体ベースの治療の転帰を改善し得る。

0011

ＣＤ３８の高発現に依存しない、ＣＤ３８特異的な標的治療に対する効力及び潜在的な反応を増加させるための潜在的な解決法は、放射免疫療法（ＲＩＴ）である。ＲＩＴは、腫瘍関連抗原に対する抗体による放射性核種の標的化を介して有用な抗腫瘍療法として出現した。

0012

したがって、本発明は、ＣＤ３８に対するモノクローナル抗体を含む組成物に関し、抗体は、アクチニウム（225Ａｃ）等のα線放出核種で標識される。本発明の特定の態様によれば、組成物は、ＣＤ３８に対する非標識抗体、及び／又は化学療法剤、抗炎症剤、免疫抑制剤、免疫調節剤、もしくは抗骨髄腫剤等の１つ以上の追加の治療薬を更に含み得る。本発明の特定の態様によれば、モノクローナル抗体は、キレート剤を介して放射性核種で標識されてもよい。

0013

本発明はまた、ＣＤ３８に対するアクチニウム（225Ａｃ）標識モノクローナル抗体と、用量及び投与の指示を提供する表示とを含む製造品にも関する。

0014

本発明は更に、ＣＤ３８に対する放射標識モノクローナル抗体を含む組成物の投与によって、血液悪性腫瘍を有する哺乳動物を治療するための方法、ＣＤ３８を発現する細胞の成長及び／又は増殖を阻害するための方法、ならびにＣＤ３８を発現する細胞に関与する疾患又は障害を治療する方法に関する。

0015

本発明の目的は、添付の特許請求の範囲に具体的に概説される組み合わせによって実現され、かつ達成される。前述の概略的な説明ならびに後述の本発明の詳細な説明及び例は、本発明の様々な態様を説明するために提供されるのであって、決して記載される実施形態のいずれかを限定するものとして見なされるべきではない。

0016

アクチニウム225Ａｃ）でダラツムマブを放射標識するための方法の概略図を提供し、パネル（Ａ）は、二官能性キレーターＳ−２−（４−イソチオシアナトベンジル）−１，４，７，１０テトラアザシクロドデカン四酢酸（ｐ−ＳＣＮ−Ｂｎ−ＤＯＴＡ：図中でＤＯＴＡと称される）のモノクローナル抗体ダラツムマブ（ＤＡＲＡ）への結合を示し、パネル（Ｂ）は、225Ａｃ−ＤＡＲＡを提供するための225ＡｃによるＤＯＴＡ−ＤＡＲＡコンジュゲートの放射標識を示す。
キレーターＤＯＴＡとＤＡＲＡの免疫複合体によるアクチニウム（225Ａｃ）のキレート化の収率を示す棒グラフを提供し、コンジュゲーション反応は、３７oＣ又は室温で、ＤＡＲＡに対して様々なモル過剰のＤＯＴＡキレーターで行われる。０．１５Ｍ酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ６．５）中０．３ｍｇ／ｍｌのＤＯＴＡ−ＤＡＲＡを、３７oＣ又は室温で６０分間、１ｕＣｉ／ｕｇ ＤＡＲＡで、０．０１Ｍ ＨＣＬ中の225Ａｃで標識した（ＤＯＴＡによる225Ａｃのキレート化）。
様々な放射標識ＤＡＲＡ試料の４oＣでの保存安定性を示すグラフを提供し、試料は、３７oＣ又は室温で、ＤＡＲＡに対して様々なモル過剰のＤＯＴＡで行われたＤＯＴＡとＤＡＲＡとのコンジュゲーション反応に由来する。
様々な放射標識ＤＡＲＡ試料の室温での保存安定性を示すグラフを提供し、試料は、３７oＣ又は室温で、ＤＡＲＡに対して様々なモル過剰のＤＯＴＡで行われたＤＯＴＡとＤＡＲＡとのコンジュゲーション反応に由来する。
225Ａｃ−ＤＡＲＡコンジュゲートの様々な濃度のＣＤ３８に対する結合を示すグラフを提供し、225Ａｃ−ＤＡＲＡコンジュゲートは、３７oＣ又は室温で、ＤＡＲＡに対して様々なモル過剰のＤＯＴＡで行われたＤＯＴＡとＤＡＲＡとのコンジュゲーション反応に由来する。
様々な濃度のＤＡＲＡ及びＤＯＴＡ−ＤＡＲＡがプラスチック上で固定化され、補体タンパク質Ｃ１ｑとともにインキュベートされたときの結果を示すグラフを提供する。Ｃ１ｑ結合の量は、抗Ｃ１ｑ−ＨＲＰをプローブとして使用して評価した。
様々な濃度のＤＡＲＡ及びＤＯＴＡ−ＤＡＲＡが、ＣＤ３８を発現する標的細胞に添加されたときの結果を示すグラフを提供する。ＦｃγＲ（ＩＩＩ）によって活性化されたときにルシフェラーゼを発現するエフェクター細胞を標的細胞に添加し、Ｂｉｏ−Ｇｌｏｗ（商標）の添加後に発光を測定した。誘導倍率＝ＲＬＵ（誘導バックグラウンド）／ＲＬＵ（抗体なしの対照バックグラウンド）。ＡＤＣＣを活性化することが分かっている抗ＣＤ２０抗体を、陽性対照として使用した。
225Ａｃ−ＤＡＲＡコンジュゲートがＤａｕｄｉ細胞の溶解を誘導する能力を、非標識ＤＡＲＡ、225Ａｃ−ＤＯＴＡ−ＩｇＧコンジュゲート、及び未処理細胞と比較して示すグラフを提供し、図５Ａ〜図５Ｄは、２４、４８、７２、及び９６時間の曝露時間をそれぞれ示す。
図５Ａ〜図５Ｄに見られるデータの概要グラフを提供し、様々な濃度の225Ａｃ−ＤＡＲＡについて経時的な細胞溶解パーセントを示す。
様々な濃度の225Ａｃ−ＤＡＲＡコンジュゲートが、９６時間にわたってＡＤＣＣによる２８ＢＭ及び２８ＰＥ多発性骨髄腫細胞の溶解をそれぞれ誘導する能力を示すグラフを提供する。
様々な濃度の225Ａｃ−ＤＯＴＡ−ＤＡＲＡコンジュゲートへの曝露におけるＤａｕｄｉ、２８ＢＭ、及び２８ＰＥ細胞の細胞溶解結果を比較する棒グラフを提供し、図８Ａ〜図８Ｃは、４８、７２、及び９６時間の曝露時間をそれぞれ示す。
Ｄａｕｄｉ腫瘍担持ＳＣＩＤマウスにおける111Ｉｎ−ＤＡＲＡの生体内分布を示す。マウスに111Ｉｎ−ＤＡＲＡ（４００μＣｉ）の単回腹腔内（ＩＰ）注射を投与し、注射後１、４、２４時間、続いて２、３、７及び１０日目にｍｉｃｒｏＳＰＥＣＴ／ＣＴで撮像した。
Ｄａｕｄｉ腫瘍担持ＳＣＩＤマウスの放射免疫療法治療（ＲＩＴ）の結果を示し、図５ＡはＲＩＴ後の腫瘍体積を示し、図５ＢはＲＩＴ後のマウス生存期間のカプランマイヤープロットを示す。ＳＣＩＤマウスの右側腹部に、ＣＤ３８陽性Ｄａｕｄｉ細胞を注射した。腫瘍が約２００ｍｍ3に達したとき、２００もしくは４００ｎＣｉの225Ａｃ−ＤＡＲＡ（０．３μｇ）、又は同量の０．３μｇ裸のＤＡＲＡもしくは３０倍高い用量（１０μｇ）の裸のＤＡＲＡ、又は生理食塩水の単回ＩＰ注射で処理した。式Ｖ＝０．５（ＬＷ2）を用いて腫瘍体積を算出した。腫瘍体積が４，０００ｍｍ3に達したときにマウスを屠殺した。
225Ａｃ−ＤＡＲＡを用いるＲＩＴの安全性評価の結果を示し、図１１ＡはＲＩＴ後のマウスの体重を示し、図１１Ｂは、ＲＩＴ後７日目の血液、肝臓及び腎臓の健康パラメータを示す。ＳＣＩＤマウスの右側腹部に、ＣＤ３８陽性Ｄａｕｄｉ細胞を注射した。腫瘍が約２００ｍｍ3に達したとき、２００もしくは４００ｎＣｉの225Ａｃ−ＤＡＲＡ（０．３μｇ）、又は同量の０．３μｇ裸のＤＡＲＡもしくは３０倍高い用量（１０μｇ）の裸のＤＡＲＡ、又は生理食塩水の単回ＩＰ注射で処理した。ＲＩＴ後は３日ごとにマウスの体重をモニタリングした。ＲＩＴ後７日目に血液を採取し、指示されたパラメータについて分析した。
ＧｅｎＢａｎｋ受入れ番号ＮＰ＿００１７６６に示されるようなヒトＣＤ３８のアミノ酸配列を提供する。

0017

定義及び略語
単数形「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」等は、文脈上別途明確に指示されない限り、複数の指示対象を含む。したがって、例えば、「ａ」希釈剤は、単一の希釈剤及び複数の異なる希釈剤の両方を含む。

0018

数字表示、例えば、温度、時間、量、及び濃度の前に使用される場合の「約」という用語は、±１０％、±５％、又は±１％変化し得る近似値を示す。

0019

「含んでいる」又は「含む」は、組成物及び方法が列挙される要素を含むが、他を排除しないことを意味することを意図する。組成物及び方法を定義するために使用される場合の「〜から本質的になる」は、記載される目的のために、その組み合わせにとって任意の本質的に重要な他の要素を排除することを意味するものとする。したがって、本明細書に定義される要素から本質的になる方法は、特許請求される発明の基本的及び新規の特徴（複数可）に実質的に影響を及ぼさない他のステップ又は組成物を排除しない。

0020

「モノクローナル抗体」は、単一分子組成物の抗体分子の調製物を指す。モノクローナル抗体組成物は、特定のエピトープに対して単一結合特異性及び親和性を示すか、又は二特異性モノクローナル抗体の場合、２つの別個のエピトープに対する二重結合特異性を示す。したがって、「モノクローナル抗体」は、抗体重鎖からのＣ末端リジンの除去等の考えられる周知の変化を除いて、各重鎖及び各軽鎖における単一のアミノ酸組成物を有する抗体集団を指す。モノクローナル抗体は、抗体集団内に異種グリコシル化を有し得る。モノクローナル抗体は、単一特異性もしくは多特異性であり得るか、又は一価、二価もしくは多価であり得る。二特異性抗体は、モノクローナル抗体という用語に含まれる。

0021

「エピトープ」は、抗体によって認識され得る、及び抗体によって結合され得る標的分子の部位を指す。タンパク質エピトープの場合、例えば、これは抗体によって結合されるアミノ酸（及び特にそれらの側鎖）を指してもよい。重複するエピトープは、少なくとも１〜５個の共通のアミノ酸残基を含む。抗体のエピトープを特定する方法は当業者に既知であり、例えば、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｅｄ Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｄａｖｉｄ Ｌａｎｅ（１９８８）に記載されているものを含む。

0022

「ヒト化抗体」は、抗原結合部位がヒト以外の種に由来し、可変領域フレームワークがヒト免疫グロブリン配列に由来する抗体を指す。ヒト化抗体は、フレームワーク領域に置換を含んでもよく、そのためフレームワークは、発現したヒト免疫グロブリン又は生殖系列遺伝子配列の正確なコピーではない場合がある。

0023

「ヒト抗体」は、フレームワーク及び抗原結合部位の両方がヒト起源の配列に由来する重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を有する抗体を指す。抗体が定常領域を含む場合、定常領域もまたヒト起源の配列に由来する。

0024

ヒト抗体は、ヒト起源の配列に「由来する」可変ドメイン配列を有する重鎖可変領域又は軽鎖可変領域を含み、抗体の可変領域は、ヒト生殖系列免疫グロブリン又は再編成された免疫グロブリン遺伝子を使用する系から得られる。そのような系は、ファージ上に提示されたヒト免疫グロブリン遺伝子ライブラリ、及びヒト免疫グロブリン遺伝子座を保有するマウス等のトランスジェニック非ヒト動物を含む。ヒト抗体は、例えば、天然に存在する体細胞突然変異、又はフレームワークもしくは抗原結合部位における意図的な置換の導入、あるいはその両方に起因して、ヒト生殖系列免疫グロブリン又は再編成された免疫グロブリン遺伝子と比較した場合にアミノ酸の差異を含み得る。典型的には、ヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン又は再編成された免疫グロブリン遺伝子によってコードされるアミノ酸配列と、少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％同一のアミノ酸配列を有する抗体を指す。

0025

「免疫反応性」は、特定の抗原を認識して結合する免疫グロブリンの能力の尺度を指す。

0026

「単離された抗体」は、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体又は抗体断片を指す（例えば、ＣＤ３８に特異的に結合する単離された抗体は、ヒトＣＤ３８以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない）。しかしながら、ＣＤ３８に特異的に結合する単離された抗体は、上述のように、他の抗原に対して交差反応性を有する場合がある。更に、単離された抗体は、他の細胞物質及び／又は化学物質を実質的に含まない場合がある。「単離された抗体」は、より高い純度まで単離された抗体、例えば、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％純粋な抗体を包含する。

0027

「薬学的に許容可能な塩」は、塩基性化合物、例えば、塩基性アミノ基を含む化合物の酸付加塩、及び酸性化合物、例えば、カルボキシル基を含む化合物の塩基性塩、及び酸性部分と塩基性部分の両方を含む化合物の両性塩を指すため、これらの塩は、好ましくはヒトへの、インビボでの投与に適している。様々な有機酸及び無機酸が、酸付加塩を形成するために使用され得る。薬学的に許容可能な塩は、当該技術分野で周知の様々な有機及び無機の対イオンに由来する。薬学的に許容可能な塩は、分子が塩基性官能基を含む場合、ほんの一例として、塩酸塩、臭化水素酸塩、酒石酸塩、メシル酸塩、酢酸塩、マレイン酸塩、シュウ酸塩等を含み、分子が酸性官能基を含む場合、ほんの一例として、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アンモニウム、テトラアルキルアンモニウム、Ｎ−メチルモルホリニウム等を含む。一実施形態において、エザチオスタットの薬学的に許容可能な塩はエザチオスタット塩酸塩である。

0028

本明細書で使用される場合、「癌」は、限定されないが、固形癌（例えば、腫瘍）及び血液悪性腫瘍を含む。

0029

血液癌としても知られる「血液悪性腫瘍」は、骨髄又は免疫系の他の細胞等の血液形成組織において発生する癌である。血液悪性腫瘍は、限定されないが、白血病（例えば、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性前骨髄球性白血病、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性混合系統白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、ヘアリーセル白血病及び大顆粒リンパ球性白血病）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、骨髄増殖性疾患（真性多血症、本態性血小板増加症、原発性骨髄線維症及び慢性骨髄性白血病）、リンパ腫、多発性骨髄腫、ＭＧＵＳ及び類似の障害、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、縦隔原発Ｂ細胞性大細胞型リンパ腫、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、形質転換濾胞性リンパ腫、脾臓周辺帯リンパ腫、リンパ球性リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、及び他のＢ細胞悪性腫瘍を含む。

0030

本明細書で使用される場合、対象の「末梢血リンパ球」は、対象の血液中を循環する成熟リンパ球を意味するものとする。末梢血リンパ球の例として、限定されないが、末梢血Ｔ細胞、末梢血ＮＫ細胞及び末梢血Ｂ細胞が挙げられる。対象の末梢血リンパ球集団は容易に測定可能である。したがって、枯渇事象（例えば、低131Ｉ−ＢＣ８用量の投与）後に少なくとも１つの種類の末梢血リンパ球のレベルにおける減少を測定することにより、対象においてリンパ球枯渇が起こったと容易に判断できる。

0031

「固形癌」は、限定されないが、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭部又は頸部の癌、皮膚又は眼球内の悪性黒色腫、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌、直腸癌、肛門部の癌、胃癌、精巣癌、子宮癌、卵管癌、子宮内膜癌、子宮頸癌、膣癌、外陰部癌、食道癌、小腸癌、内分泌系癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟部組織肉腫、尿道癌、陰茎癌、小児腫瘍、膀胱癌、腎臓又は尿管の癌、腎盂癌、中枢神経系（ＣＮＳ）新生物、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍血管新生、脊髄軸腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、カポジ肉腫、類表皮癌、扁平上皮癌、アスベストによって誘発されるものを含む環境誘発性の癌を含む。

0032

本明細書で使用される場合、「対象」という用語は、限定されないが、ヒト、非ヒト霊長類、イヌ、ネコ、ウマ、ヒツジ、ヤギ、ウシ、ウサギ、ブタ、ラット、及びマウス等の哺乳動物を含む。対象がヒトである場合、対象は任意の年齢であり得る。例えば、対象は６０歳以上、６５歳以上、７０歳以上、７５歳以上、８０歳以上、８５歳以上、又は９０歳以上であり得る。代替として、対象は５０歳以下、４５歳以下、４０歳以下、３５歳以下、３０歳以下、２５歳以下、又は２０歳以下であり得る。癌に罹患したヒト対象の場合、対象は、新たに診断され得るか、又は再発及び／もしくは難治性であり得るか、又は寛解期にあり得る。「患者」及び「対象」は、本明細書において互換的に使用される。

0033

本明細書で使用される場合、「放射性同位元素」は、α線放出同位元素、β線放出同位元素、及び／又はγ線放出同位元素であり得る。放射性同位元素の例として以下が挙げられる：90Ｙ、89Ｓｒ、153Ｓｍ、32Ｐ、225Ａｃ、213Ｂｉ、213Ｐｏ、211Ａｔ、212Ｂｉ、213Ｂｉ、223Ｒａ、227Ｔｈ、149Ｔｂ、131Ｉ、137Ｃｓ、212Ｐｂ及び103Ｐｄ。したがって、本発明において想定される放射標識抗体は、限定されないが、90Ｙ−抗ＣＤ３８、89Ｓｒ−抗ＣＤ３８、153Ｓｍ−抗ＣＤ３８、32Ｐ−抗ＣＤ３８、225Ａｃ−抗ＣＤ３８、213Ｂｉ−抗ＣＤ３８、213Ｐｏ−抗ＣＤ３８、211Ａｔ−抗ＣＤ３８、212Ｂｉ−抗ＣＤ３８、213Ｂｉ−抗ＣＤ３８、223Ｒａ−抗ＣＤ３８、227Ｔｈ−抗ＣＤ３８、149Ｔｂ−抗ＣＤ３８、131Ｉ−抗ＣＤ３８、137Ｃｓ−抗ＣＤ３８、212Ｐｂ−抗ＣＤ３８、及び103Ｐｄ−抗ＣＤ３８を含む。

0034

本明細書で使用される場合、癌に罹患した対象を「治療すること」は、限定されないが、（ｉ）癌の進行を遅延、停止又は逆転させること、（ｉｉ）癌の症状の進行を遅延、停止又は逆転させること、（ｉｉｉ）癌の再発の可能性を低減すること、及び／又は（ｉｖ）癌の症状が再発する可能性を低減することを含む。特定の好ましい態様によれば、癌に罹患した対象を治療することは、（ｉ）理想的には癌が排除されるまで、癌の進行を逆転させること、及び／又は（ｉｉ）理想的には症状が排除されるまで、癌の症状の進行を逆転させること、及び／又は（ｉｉｉ）再発の可能性を低減もしくは排除すること（すなわち、理想的には残存するあらゆる癌細胞を破壊する地固め療法）を意味する。

0035

「治療有効量」は、必要な投与量でかつ必要な期間にわたって、所望の治療結果を達成するのに有効な量を指す。治療有効量は、個体の病態、年齢、性別、及び体重等の要因、ならびに個体において所望の反応を引き出す治療薬又は治療薬の組み合わせの能力に応じて異なり得る。有効な治療薬又は治療薬の組み合わせの指標の例として、例えば、患者の健康の改善、腫瘍量の減少、腫瘍の成長の停止もしくは鈍化、及び／又は体内の他の場所への癌細胞の転移の不在が挙げられる。

0036

「成長を阻害する」は、治療薬又は治療薬の組み合わせの非存在下で同じ細胞又は組織の成長における低下又は遅延と比較した場合に、治療薬又は治療薬もしくは薬物の組み合わせと接触させたときのインビトロ又はインビボでの悪性細胞又は組織（例えば、腫瘍）の成長における測定可能な低下又は遅延を指す。インビトロ又はインビボでの悪性細胞又は組織の成長の阻害は、少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％であり得る。

0037

「ＣＤ３８」は、ヒトＣＤ３８タンパク質を指す（同義語：ＡＤＰ−リボシルシクラーゼ１、ｃＡＤＰｒヒドロラーゼ１、環状ＡＤＰ−リボースヒドロラーゼ１）。ヒトＣＤ３８は、配列番号１（図１２）に示されるアミノ酸配列を有する。

0038

別途定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載されるものと類似又は同等の方法及び材料を本明細書に記載の実施又は試験で使用することができるが、適切な方法及び材料を以下に記載する。

0039

発明の詳細な説明
本発明は、ＣＤ３８に対する放射標識モノクローナル抗体を含む組成物と、該組成物の投与によって、血液悪性腫瘍を有する哺乳動物を治療するための方法、ＣＤ３８を発現する細胞の成長及び／又は増殖を阻害するための方法、ならびにＣＤ３８を発現する細胞に関与する疾患又は障害を治療する方法とに関する。

0040

ヒトＣＤ３８は、ＧｅｎＢａｎｋ受入れ番号ＮＰ＿００１７６６及び配列番号１（図１２）に示されるアミノ酸配列を有する。ＣＤ３８が、細胞質ドメインを表すアミノ酸残基１〜２１、膜貫通ドメインを表すアミノ酸残基２２〜４２、及びＣＤ３８の細胞外ドメインを表す残基４３〜３００を有する、１回膜貫通型のＩＩ膜タンパク質であることは周知である。

0041

ダラツムマブ、ＭＯＲ２０２、又はＳＡＲ６５０９８４等のＣＤ３８に対する抗体は、これまで、そして現在も、多発性骨髄腫を含む血液悪性腫瘍及び形質細胞障害を治療するその有効性について臨床で評価されている。各抗体は、ＣＤ３８の細胞外領域の異なる部分に結合することが分かっており（表Ｉ）、それぞれ異なる臨床応答（例えば、抗腫瘍効果）を示す。Ｄａｒｚａｌｅｘ（登録商標）としてＪｏｈｎｓｏｎ＆Ｊｏｈｎｓｏｎ（Ｊａｎｓｓｅｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ）／Ｇｅｎｍａｂから入手可能なダラツムマブは、ｄｅ Ｗｅｅｒｓらに対する刊行物“Ｄａｒａｔｕｍｕｍａｂ，ａ Ｎｏｖｅｌ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｈｕｍａｎ ＣＤ３８ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ，Ｉｎｄｕｃｅｓ Ｋｉｌｌｉｎｇ ｏｆ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｍｙｅｌｏｍａ ａｎｄ Ｏｔｈｅｒ Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌ Ｔｕｍｏｒｓ，”Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２０１０，１８６（３）１８４０−１８４８に記載されており、Ｃｅｌｇｅｎｅ Ｃｏｒｐ．／Ｍｏｒｐｈｏｓｙｓから入手可能なＭＯＲ２０２は、米国特許第８，８７７，８９９号に記載されており、Ｓａｎｏｆｉ／ＩｍｍｕｎｏｇｅｎからＩｓａｔｕｘｉｍａｂとして入手可能なＳＡＲ６５０９８４は、Ｐａｒｋらの“ＳＡＲ６５０９８４：Ａ Ｐｏｔｅｎｔ Ａｎｔｉ−ＣＤ３８ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ａｎｔｉｂｏｄｙ ｗｉｔｈ Ｔｈｒｅｅ Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ Ａｃｔｉｏｎ（Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ，ＡＤＣＣ，ＣＤＣ）ｆｏｒ Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍａｌｉｇｎａｎｃｉｅｓ，”ＢＬＯＯＤ，ｖｏｌ．１１２，Ｎｏ．１１，Ｎｏｖ．２００８，ｐ．９５１、及びＤｅｃｋｅｒｔらに対する刊行物“ＳＡＲ６５０９８４，Ａ Ｎｏｖｅｌ Ｈｕｍａｎｉｚｅｄ ＣＤ３８−Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｙ，Ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｓ Ｐｏｔｅｎｔ Ａｎｔｉｔｕｍｏｒ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ｉｎ Ｍｏｄｅｌｓ ｏｆ Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｍｙｅｌｏｍａ ａｎｄ Ｏｔｈｅｒ ＣＤ３８+Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃ Ｍａｌｉｇｎａｎｃｉｅｓ，”Ｃｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２０１４；２０：４５７４−８３、ならびに米国特許第８，１５３，７６５号に記載されている。下の表１は、ＣＤ３８に結合する多数の抗体、又はその断片、及びＣＤ３８分子上のそれらのエピトープ（結合部位）を列挙しており（図１２を参照｝、それらの一部又は全てが、本発明の様々な態様に応じて有用であり得る。



１）Ｔｉｓｓｕｅ Ａｎｔｉｇｅｎｓ ２０００，（５６）：５３９−５４７ ａｎｄＢＭＣＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ２００４，（５）：２１
２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２０１１，（２８６）：２２１７０−２２１７７
３）米国特許第８，１５３，７６５号及びＣｌｉｎ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ２０１４，２０（１７）：４５７４−８３
４）Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０１１，（１８６）：１８４０−１８４８
５）米国特許第８，８７７，８９９号

0042

これらの抗体がＣＤ３８陽性細胞を除去することにより提案された方法は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、及びアポトーシスを含む。

0043

「抗体依存性細胞傷害」、「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」又は「ＡＤＣＣ」は、エフェクター細胞上で発現されるＦｃガンマ受容体（ＦｃγＲ）を介した、抗体被覆標的細胞と、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単球、マクロファージ及び好中球等の溶解活性を有するエフェクター細胞との相互作用に依存する、細胞死を誘導するための機序である。例えば、ＮＫ細胞はＦｃγＲＩＩＩａを発現する一方で、単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ及びＦｃｖＲＩＩＩａを発現する。ＣＤ３８発現細胞等の抗体被覆標的細胞の死は、膜孔形成タンパク質及びプロテアーゼの分泌によるエフェクター細胞活性の結果として起こる。

0044

「補体依存性細胞傷害」又は「ＣＤＣ」は、標的結合抗体のＦｃエフェクタードメインが補体成分Ｃ１ｑに結合してそれを活性化し、次に補体成分Ｃ１ｑが補体カスケードを活性化して標的細胞の死をもたらす、細胞死を誘導するための機序を指す。補体の活性化は、白血球上の補体受容体（例えば、ＣＲ３）に結合することによってＡＤＣＣを促進する標的細胞表面上の補体成分の堆積ももたらし得る。

0045

「アポトーシス」は、標的細胞への抗体結合が、不可欠な細胞シグナル伝達経路を妨害して細胞の自己破壊をもたらすプログラム細胞死の機序を指す。

0046

ＣＤ３８に特異的に結合する抗体のＡＤＣＣ活性を評価するために、抗体を免疫エフェクター細胞と組み合わせてＣＤ３８発現細胞に添加してもよく、それをＣＤ３８発現細胞の細胞溶解をもたらす抗原−抗体錯体によって活性化することができる。細胞溶解は、通常、溶解細胞からの標識（例えば、放射性基質、蛍光染料又は天然の細胞内タンパク質）の放出によって検出される。そのようなアッセイのための例示的なエフェクター細胞は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）及びＮＫ細胞を含む。

0047

例示的なＡＤＣＣのアッセイにおいて、ＣＤ３８発現細胞を51Ｃｒで標識して十分に洗浄することができる。抗ＣＤ３８抗体は、様々な濃度でＣＤ３８発現細胞に添加されてもよく、エフェクター細胞（例えば、末梢血単核細胞からのＮＫ細胞）を添加することによってアッセイが開始され得る。３７℃で様々な時間間隔でインキュベーションした後、遠心分離によりアッセイを停止させ、溶解細胞からの51Ｃｒ放出をシンチレーションカウンターで測定する。細胞傷害性の割合は、ＣＤ３８発現細胞に３％の過塩素酸を添加することによって誘導され得る最大溶解％として算出することができる。

0048

細胞傷害性の例示的アッセイでは、様々な量の抗ＣＤ３８抗体で処理したＣＤ３８発現細胞にテトラゾリウム塩が添加される。生きたミトコンドリアにおいて、ＸＴＴが、ミトコンドリア脱水素酵素によって橙色の生成物に還元され、細胞表面に移される。橙色の生成物は、光学的に定量化することができ、生細胞の数を反映する。代替として、生細胞からのエステラーゼは、無色のカルセインを蛍光分子として加水分解することが分かっている。蛍光は、測定及び定量化することができ、試料中の生細胞の数を反映する。死滅細胞の総量は、インタクトな膜によって生細胞から除外されるヨウ化プロピジウムを使用して測定されてもよい。死滅細胞におけるヨウ化プロピシジウムによる蛍光は、フローサイトメトリーによって定量化され得る。

0049

ＣＤＣを評価するために、本明細書の実施例２に詳述されるＣ１ｑ等の補体タンパク質を、細胞傷害性のアッセイに含める必要があり得る。アポトーシス誘導の測定は、細胞傷害性のアッセイにおいてＮＫ細胞又は補体タンパク質の添加を必要としない。

0050

ＣＤ３８に対する非標識（すなわち「裸の」）モノクローナル抗体を用いる様々な血液悪性腫瘍の治療が、最近の臨床試験で成功している。このような抗体の１つであるダラツムマブは、現在、Ｊａｎｓｓｅｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｉｎｃ．からＤａｒｚａｌｅｘ（登録商標）の名称の下に多発性骨髄腫の治療薬として市販されている。治療計画は、１６ｍｇ／ｋｇ患者体重の注入による１週間に１回投与という最初の８週間の投与スケジュールを含む。解熱剤及び抗ヒスタミン剤による前処理は、注入のより一般的及び深刻な副作用の一部を改善するためのものである。例えば、全患者の半数超に起こる注入反応は、気管支痙攣、低酸素、呼吸困難、高血圧、喉頭浮腫、及び肺浮腫を含み、最長で治療後４８時間まで起こる可能性がある。治療された患者の２０パーセント超に起こる副作用は、少なくとも疲労感、悪心、下痢、便秘、筋痙攣、腰痛、悪寒、不眠、咳、及び呼吸困難を含む。したがって、ＣＤ３８に対する裸の抗体を用いる治療は、血液悪性腫瘍の治療にある程度成功しているが、治療の副作用は極めて深刻であり、モノクローナル抗体の高いタンパク質用量に関連している可能性がある。

0051

形質細胞及びリンパ球等のＢ細胞は、放射線療法に対して本質的に敏感であり、したがって、血液悪性腫瘍を標的とする放射免疫療法の魅力的な標的である。上述のように、抗ＣＤ３８抗体がＢ細胞を死滅させることができる多くの機序に加えて、ＣＤ３８に対する放射性核種標識抗体からの電離放射線の放射は、ＣＤ３８を発現する細胞に結合した抗体に近接した細胞を死滅させることができる。放射性核種は、細胞修復機構が細胞を生存させ続けることができなくなるまで細胞のＤＮＡを損傷する可能性がある放射性粒子を放射する。したがって、ＣＤ３８を発現する細胞が腫瘍に関与する場合、放射性核種は腫瘍細胞を有利に死滅させることができる。

0052

そのため、血液悪性腫瘍を治療するためにＣＤ３８を標的とする免疫療法の能力を改善するアプローチは、抗体を放射性核種で標識することを含む。ＣＤ３８に対する放射性核種標識モノクローナル抗体を用いる患者の治療において、放射性核種を腫瘍部位等のＣＤ３８を発現する細胞に局在化させてそれらの腫瘍細胞を死滅させることができる。

0053

癌細胞等の細胞にそのような損傷を誘発するために使用することができる放射性核種は、通常、高エネルギー放射体である。高エネルギー放射性核種は、細胞傷害作用を標的細胞に局在化するように、短い範囲にわたって作用することが好ましい。このようにして、非標的細胞又は非癌細胞に対する損傷を減少させるために、放射線療法はより局在的に送達される。

0054

したがって、本発明は、ＣＤ３８に対するモノクローナル抗体を含む組成物に関し、抗体は放射性核種で標識される。本発明の特定の態様によれば、ＣＤ３８に対するモノクローナル抗体は、ダラツムマブ、ＭＯＲ２０２、又はＳＡＲ６５０９８４であり得る。本発明の態様によれば、ＣＤ３８に対するモノクローナル抗体は、ダラツムマブであり得る。

0055

本発明の特定の態様によれば、放射性核種は、β線放出核種、例えば、131Ｉ、90Ｙ、177Ｌｕ、186Ｒｅ、もしくは188Ｒｅ、又はγ線放射核種、例えば、125Ｉもしくは123Ｉであり得る。

0056

本発明の特定の態様によれば、放射性核種は、例えば、アスタチン−２１１（211Ａｔ）、ビスマス−２１２（212Ｂｉ）、ビスマス−２１３（213Ｂｉ）、アクチニウム−２２５（225Ａｃ）、ラジウム−２２３（223Ｒａ）、鉛−２１２（212Ｐｂ）、トリウム−２２７（227Ｔｈ）、及びトリウム−１４９（149Ｔｂ）であり得る。

0057

放射性核種アクチニウム（225Ａｃ）は、１０日間の半減期を有する純粋なα放射体である。６つの比較的短寿命の娘放射性核種のカスケードを介して崩壊し、安定な209Ｂｉになる。225Ａｃの主要破壊経路は、２８ＭｅＶの大きな累積エネルギーを有する正味４つのα粒子と、１．６及び０．６ＭｅＶの最大エネルギーを有する２つのβ壊変をもたらす。比較的長い１０日間の半減期と、急速な崩壊鎖で発生した複数のα粒子が、225Ａｃを高度に細胞傷害性の放射性核種にする。

0058

したがって、本発明の特定の態様によれば、α線放出核種は、アクチニウム−２２５（225Ａｃ）であり得る。モノクローナル抗体、抗体断片、又は小型ペプチドリガンドにコンジュゲートされた225Ａｃペイロードは、腫瘍部位に直接、高エネルギーα粒子を送達することができ、腫瘍細胞内に著しいペイロード蓄積を必要とすることなく致死性のＤＮＡ二本鎖切断を生成する。その短い経路長に起因して、その高エネルギーα粒子放射の範囲はほんの数細胞直径の厚さであり、それによって近くの正常組織への損傷を制限する。更に、225Ａｃ−抗体コンジュゲートは、低い標的抗原を発現する腫瘍を有する患者においてさえも有効であることが分かっているため、抗体−薬物コンジュゲートに勝る重要な利点を提供する。これは、225Ａｃの大きな細胞破壊効果によるものであり、癌細胞に対する効果を発揮するために何百という抗体分子がそれらのそれぞれの抗原に結合する必要がある抗体−薬物コンジュゲートとは著しく対照的である。

0059

薬物又は毒素に勝る放射性ペイロードの他の利点は以下の通りである：１）放射線送達に使用される抗体は、細胞を死滅させるために内部移行させる必要がない、２）放射線の「多門照射」効果のために、腫瘍内の全ての癌細胞が抗体によって標的化される必要がない、及び３）抗体−薬物コンジュゲートとは対照的に、抗体に結合した放射性同位元素は、その後の使用を制限するような著しい免疫応答を誘導する可能性が低い。更に、本明細書に報告される研究は、225Ａｃ標識抗体の安定性を実証している。

0060

モノクローナル抗体は、当該技術分野で既知の任意の手段によってα線放出核種で標識されることができる。本発明の一態様によれば、放射性核種は、モノクローナル抗体にコンジュゲートされるキレート剤によって結合又はキレート化され得る。

0061

本明細書に記載されるＣＤ３８に対する放射性核種標識モノクローナル抗体（「放射標識抗ＣＤ３８」）は、最初にキレーターとコンジュゲートされた抗ＣＤ３８（「コンジュゲート抗ＣＤ３８」）を形成し、次いでコンジュゲート抗ＣＤ３８で放射核種をキレート化して放射標識抗ＣＤ３８を形成することによって調製することができる。放射性核種は、コンジュゲーション後の任意の時点で、コンジュゲート抗ＣＤ３８によってキレート化され得る。

0062

本明細書に記載される方法を用いて放射標識抗ＣＤ３８を形成する場合、キレート化及びコンジュゲーションの程度は有利に高い。本明細書で使用される場合、「キレート化の程度」及び「コンジュゲーションの程度」という用語は、反応で使用される総キレート剤で除した、キレート剤によって結合された放射性核種の割合、及びモノクローナル抗体と成功裏にコンジュゲートするキレート剤の割合をそれぞれ意味すると解釈されてもよい。

0063

本発明の反応のコンジュゲート抗ＣＤ３８を形成する場合のコンジュゲーションの程度は、通常、５０％超、７０％超、９０％超、９５％超、約９６％超、約９７％超、約９８％超、又は約９９％超である。

0064

本発明の反応の放射標識抗ＣＤ３８を形成する場合の放射性核種のキレートの程度は、通常、５０％超、７０％超、９０％超、９５％超、約９６％超、約９７％超、約９８％超、又は約９９％超である。

0065

本明細書に記載される放射標識抗ＣＤ３８を形成する方法によれば、ＣＤ３８に対するモノクローナル抗体は、キレート剤を含む緩衝溶液中に溶解され得る。ｐＨは、コンジュゲーション反応混合物中のキレート剤と抗体とのコンジュゲーションの条件を最適化するように選択され得る。コンジュゲーション反応混合物は、炭酸水素緩衝液又はリン酸緩衝液を含んでもよい。コンジュゲーション反応混合物は、約８．０〜約９．２のｐＨを有し得る。例えば、コンジュゲーション反応混合物は、約８．０、約８．１、約８．３、約８．４、約８．５、約８．６、約８．７、約８．８、約８．９、約９．０、約９．１、又は約９．２のｐＨを有し得る。コンジュゲーション反応混合物の温度は、キレート剤と標的化部分とのコンジュゲーションを促進するように調節され得る。例えば、コンジュゲーション反応混合物は、室温又は約３７℃の温度でインキュベートすることができる。コンジュゲーション反応混合物は、例えば、約１．５時間等の、コンジュゲーションを提供するのに十分な任意の時間、インキュベートされてもよい。

0066

コンジュゲート抗ＣＤ３８は、放射性核種を含む緩衝溶液中に溶解されてもよい。ｐＨは、キレート化反応混合物中の放射性核種とコンジュゲート抗ＣＤ３８とのキレート化の条件を最適化するように選択され得る。キレート化反応混合物はゲンチジン酸を含んでもよい。キレート化反応混合物は、約５．５〜約７．０のｐＨを有し得る。例えば、キレート化反応混合物は、約５．５、約５．６、約５．７、約５．８、約５．９、約６．０、約６．１、約６．２、約６．３、約６．４、約６．５、約６．６、約６．７、約６．８、約６．９、又は約７．０のｐＨを有し得る。

0067

キレート化反応混合物の温度は、放射性核種とコンジュゲート抗ＣＤ３８とのキレート化を促進するように調節され得る。例えば、キレート化反応混合物は、約３７℃の温度でインキュベートされてもよい。キレート化反応混合物は、約１．５時間インキュベートされてもよい。一定期間後、溶液を反応停止キレート（例えば、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ））の添加によって反応停止させることができ、反応混合物を精製することができる。キレート化反応混合物は、反応停止キレートの添加後更にインキュベートされてもよく、例えば、反応停止キレートの添加後、約３７℃で約３０分間更にインキュベートされてもよい。

0068

本発明において有用なキレーターは、金属イオンを封鎖することに加えて、例えば抗体等の生物学的担体に共有結合する能力という二重官能性を有する化合物である。多数のキレーターが当該技術分野で既知である。本発明における使用に適した例示的なキレーターは、限定されないが、Ｓ−２−（４−イソチオシアナトベンジル）−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン四酢酸（ｐ−ＳＣＮ−Ｂｎ−ＤＯＴＡ）、ジエチレントリアミン五酢酸（ＤＴＰＡ）；エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）；１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−Ｎ，Ｎ′，Ｎ″，Ｎ′″−四酢酸（ＤＯＴＡ）；ｐ−イソチオシアナトベンジル−１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−四酢酸（ｐ−ＳＣＮ−Ｂｚ−ＤＯＴＡ）；１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−Ｎ，Ｎ′，Ｎ″−三酢酸（ＤＯ３Ａ）；１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−テトラキス（２−プロピオン酸）（ＤＯＴＭＡ）；３，６，９−トリアザ−１２−オキサ−３，６，９−トリカルボキシメチレン−１０−カルボキシ−１３−フェニル−トリデカン酸（「Ｂ−１９０３６」）；１，４，７−トリアザシクロノナン−Ｎ，Ｎ′，Ｎ″−三酢酸（ＮＯＴＡ）；１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラデカン−Ｎ，Ｎ′，Ｎ″，Ｎ′″−四酢酸（ＴＥＴＡ）；トリエチレンテトラアミン六酢酸（ＴＴＨＡ）；トランス−１，２−ジアミノヘキサン四酢酸（ＣＹＤＴＡ）；１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１−（２−ヒドロキシプロピル）−４，７，１０−三酢酸（ＨＰ−ＤＯ３Ａ）；トランス−シクロヘキサン−ジアミン四酢酸（ＣＤＴＡ）；トランス（１，２）−シクロヘキサンジエチレントリアミン五酢酸（ＣＤＴＰＡ）；１−オキサ−４，７，１０−トリアザシクロドデカン−Ｎ，Ｎ′，Ｎ″−三酢酸（ＯＴＴＡ）；１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−テトラキス｛３−（４−カルボキシル）−ブタン酸｝；１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−テトラキス（酢酸−メチルアミド）；１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカン−１，４，７，１０−テトラキス（メチレンホスホン酸）；及びその誘導体等のキレーターを含む。

0069

１つ以上のステップを用いて、コンジュゲート反応混合物の他の成分からコンジュゲートＣＤ３８を、又はキレート化反応混合物の他の成分から放射標識抗ＣＤ３８を分離することができる。例えば、反応混合物は、特定の分子量カットオフを有する濾過デバイス（例えば、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ遠心分離デバイス）に移送することができ、そうすることで、濾過デバイスを通る反応混合物の濾過により、それぞれの反応混合物の他の成分からコンジュゲート抗ＣＤ３８又は放射標識抗ＣＤ３８を分離することができる。濾過を用いて、少なくとも約６０％、少なくとも約６５％、少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、少なくとも約９０％、％、少なくとも約９５％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％、又は少なくとも約９９．５％の純度を有するコンジュゲート抗ＣＤ３８又は放射標識抗ＣＤ３８を得ることができる。

0070

本発明の特定の態様によれば、分離（例えば、精製）からのコンジュゲート抗ＣＤ３８又は放射標識抗ＣＤ３８の収率は、最終生成物の少なくとも約７０％、少なくとも約７５％、少なくとも約８０％、少なくとも約８５％、又は少なくとも約９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、もしくは少なくとも９９％である。

0071

本発明の一態様によれば、モノクローナル抗体は、最初にｐ−ＳＣＮ−Ｂｎ−ＤＯＴＡ又はＤＯＴＡキレート剤とコンジュゲートされてコンジュゲート抗ＣＤ３８を形成し、コンジュゲート抗ＣＤ３８のｐ−ＳＣＮ−Ｂｎ−ＤＯＴＡ又はＤＯＴＡによる225Ａｃのキレート化により放射標識抗ＣＤ３８を形成する。したがって、本発明の態様によれば、225ＡＣに関与する単一のステップのみが抗ＣＤ３８を標識するために必要である。

0072

本発明の特定の態様によれば、放射性核種（225ＡＣ）は、ＣＤ３８に対するモノクローナル抗体とのコンジュゲーションの前に、キレート剤によってキレート化されてもよい。

0073

本発明の特定の態様によれば、放射標識抗ＣＤ３８は比較的安定である。例えば、アクチニウムで標識されたモノクローナル抗体の７５％超が、４oＣで２４時間保存した後にインタクトな状態を保持し得る。

0074

本発明の特定の態様によれば、放射標識抗ＣＤ３８は、対照モノクローナル抗体と本質的に同じＣＤ３８に対する免疫反応性を示し、対照モノクローナル抗体は、アクチニウム標識モノクローナル抗体と同じＣＤ３８のエピトープに対する非標識モノクローナル抗体を含む。

0075

標識効率、放射標識抗ＣＤ３８の安定性、及び標識ＣＤ３８の免疫反応性を組み合わせて効果的な治療薬を提供する。このように、本明細書に記載される方法を用いて生成される放射標識抗ＣＤ３８は、治療薬として使用することができる。例えば、放射標識抗ＣＤ３８は、ＣＤ３８を発現する細胞及び組織に特異的に放射線量を送達する治療薬として使用され得る。したがって、本発明の特定の態様によれば、放射標識抗ＣＤ３８は、医薬組成物を形成するための薬学的に許容可能な塩又は担体を用いて溶液中で製剤化され得る。

0076

本発明の医薬組成物はまた、併用療法において投与されてもよく、すなわち、治療される疾患又は症状に関連する他の治療薬と組み合わされてもよい。そのような投与は、同時、別個、又は逐次的であり得る。同時投与の場合、薬剤は、必要に応じて、１つの組成物として、又は別個の組成物として投与されてもよい。

0077

本発明の特定の態様によれば、医薬組成物は、１つ以上の治療薬を含み得る。例示的な治療薬は、化学療法剤、抗炎症剤、免疫抑制剤、免疫調節剤、又はそれらの組み合わせを含む。

0078

治療薬は、当分野で既知の任意の標準的な投与計画に従って投与され得る。治療薬が本発明の組成物に含まれる場合、それらは１〜５００ｍｇ／ｍ2の範囲の濃度で含まれてもよく、その量は、患者の表面積（ｍ2）の関数として算出される。例えば、パクリタキセルの例示的な用量は１５ｍｇ／2〜２７５ｍｇ／ｍ2を含んでもよく、ドセタキセルの例示的な用量は６０ｍｇ／ｍ2〜１００ｍｇ／ｍ2を含んでもよく、エポチロンの例示的な用量は１０ｍｇ／ｍ2〜２０ｍｇ／ｍ2を含んでもよく、カリチアマイシンの例示的な用量は１ｍｇ／ｍ2〜１０ｍｇ／ｍ2を含んでもよい。例示的な用量が本明細書に列挙されているが、それらは参考のために提供されているだけであって、本開示の発明の薬剤の用量範囲を限定することを意図するものではない。

0079

したがって、一態様によれば、医薬組成物は少なくとも１つの化学療法剤を含み得る。例示的な化学療法剤は、例えば、メトトレキサート、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、シタラビン、フルダラビン、５−フルオロウラシル、ダカルバジン、ヒドロキシウレア、アスパラギナーゼ、ゲムシタビン、クラドリビン及び類似の薬剤等の代謝拮抗薬を含む。

0080

例示的な化学療法剤は、例えば、メクロレタミン、チオテパ、クロラムブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロホスファミド、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、ダカルバジン（ＤＴＩＣ）、プロカルバジン、マイトマイシンＣ、シスプラチン及びカルボプラチン等の他の白金誘導体、ならびに類似の薬剤等のアルキル化剤を含む。

0081

例示的な化学療法剤は、例えば、ダクチノマイシン（以前はアクチノマイシン）、ブレオマイシン、カリチアマイシン、ダウノルビシン（以前はダウノマイシン）、ドキソルビシン、イダルビシン、ミトラマイシン、マイトマイシン、ミトキサントロン、プリカマイシン、アントラマイシン（ＡＭＣ）及び類似の薬剤等の抗生物質を含む。

0082

例示的な化学療法剤は、例えば、ドセタキシン及びパクリタキセル等のタキサン、ならびにビンカアルカロイド、例えば、ビンデシン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、及びビノレルビン等の有糸分裂阻害剤を含む。

0083

例示的な化学療法剤は、トポテカン等のトポイソメラーゼ阻害剤を含む。

0084

例示的な化学療法剤は、例えば、ＥｒＢｂ１（ＥＧＦＲ）の阻害剤（ゲフィチニブ（Ｉｒｅｓｓａ（登録商標））、セツキシマブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標））、エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標））、ＨｕＭａｘ−ＥＧＦｒ（ＷＯ２００２／１００３４８に開示されている２Ｆ８）及び類似の薬剤等）、ＥｒＢｂ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）の阻害剤（トランスツズマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標）及び類似の薬剤等）等の成長因子阻害剤を含む。一実施形態において、そのような成長因子阻害剤は、ＳＣＨ−６６３３６及びＲ１１５７７７等のファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤であってもよい。一実施形態において、そのような成長因子阻害剤は、ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））等の血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）阻害剤であってもよい。

0085

例示的な化学療法剤は、イマチニブ（Ｇｌｉｖｅｃ、Ｇｌｅｅｖｅｃ ＳＴ１５７１）、ラパチニブ、ＰＴＫ７８７／ＺＫ２２２５８４及び類似の薬剤等のチロシンキナーゼ阻害剤を含む。

0086

例示的な化学療法剤は、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤を含む。そのようなヒストンデアセチラーゼ阻害剤の例として、ＳＡＨＡ（サブロイアニリドヒドロキサム酸）等のヒドロキサム酸系ハイブリッド化合物が挙げられる。

0087

例示的な化学療法剤は、ＳＣＩＯ−４６９等のＰ３８ａＭＡＰキナーゼ阻害剤を含む。

0088

例示的な化学療法剤は、血管形成、新血管新生、及び／又は他の血管新生の阻害剤を含む。そのような阻害剤の例として、ウロキナーゼ阻害剤、マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤（マリマスタット、ネオバスタット、ＢＡＹ １２−９５６６、ＡＧ ３３４０、ＢＭＳ−２７５２９１及び類似の薬剤等）、内皮細胞遊走及び増殖の阻害剤（ＴＮＰ−４７０、スクアラミン、２−メトキシエストラジオール、コンブレタスタチン、エンドスタチン、アンジオスタチン、ペニシルアミン、ＳＣＨ６６３３６（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ−Ｐｌｏｕｇｈ Ｃｏｒｐ、Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｎ．Ｊ．）、Ｒ１１５７７７（Ｊａｎｓｓｅｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａ，Ｉｎｃ、Ｔｉｔｕｓｖｉｌｌｅ，Ｎ．Ｊ．）及び類似の薬剤等）、血管形成成長因子のアンタゴニスト（ＺＤ６４７４、ＳＵ６６６８、血管形成作用物質及び／又はそれらの受容体（ＶＥＧＦ、ｂＦＧＦ、及びアンジオポエチン−１等）に対する抗体、サリドマイド（Ｔｈａｌｏｍｉｄ（登録商標））、サリドマイド誘導体（ＣＣ−５０１３（レナリドミド、Ｒｅｖｌｉｍｉｄ（商標）等）及びＣＣ４０４７（Ａｃｔｉｍｉｄ（商標））、Ｓｕｇｅｎ ５４１６、ＳＵ５４０２、抗血管形成リボザイム（アンジオザイム等）、インターフェロンα（インターフェロンα２α等）、スラミン及び類似の薬剤）、ＶＥＧＦ−Ｒキナーゼ阻害剤及び他の抗血管形成チロシンキナーゼ阻害剤（ＳＵ０１１２４８等）、内皮特異的インテグリン／生存シグナル伝達の阻害剤（ビタキシン及び類似の薬剤等）、銅アンタゴニスト／キレーター（テトラチオモリブデート、カプトプリル、及び類似の薬剤等）、カルボキシアミド−トリアゾール（ＣＡＩ）、ＡＢＴ−６２７、ＣＭ１０１、インターロイキン−１２（ＩＬ−１２）、ＩＭ８６２、ＰＮＵ１４５１５６Ｅ、ならびに血管形成を阻害するヌクレオチド分子（アンチセンス−ＶＥＧＦ−ｃＤＮＡ、アンジオスタチンをコードするｃＤＮＡ、ｐ５３をコードするｃＤＮＡ、及び欠損ＶＥＧＦ受容体−２をコードするｃＤＮＡ）ならびに類似の薬剤が挙げられる。

0089

そのような血管形成、新血管新生、及び／又は他の血管新生の阻害剤の他の例は、抗血管形成ヘパリン誘導体及び関連分子（例えば、ヘパリナーゼＩＩＩ）、テトゾロミド、ＮＫ４、マクロファージ遊走阻害因子（ＭＩＦ）、シクロオキシゲナーゼ−２阻害剤、低酸素誘導因子１の阻害剤、抗血管形成大豆イソフラボン、オルチプラズ、フマギリン及びその誘導体、ソマトスタチン誘導体、ポリ硫酸ペントサン、テコガランナトリウム、ダルテパリン、ツムスタチン、トロンボスポンジン、ＮＭ−３、コンブレスタチン、カンスタチン、アバスタチン、他の関連標的に対する抗体（抗α−ｖ／β−３インテグリン抗キニノスタチンｍＡｂ等）ならびに類似の薬剤である。

0090

例示的な化学療法剤は、サリドマイド（Ｔｈａｌｏｍｉｄ（登録商標））、サリドマイド類似体（ＣＣ−５０１３（レナリドミド、Ｒｅｖｌｉｍｉｄ（商標））及び／又はＣＣ４０４７（Ａｃｔｉｍｉｄ（商標））を含む。

0091

例示的な化学療法剤は、追加の抗体治療薬、又はプロテアソーム阻害剤、例えば、ボルテゾミブ（Ｖｅｌｃａｄｅ（登録商標））、コルチコステロイド、例えば、プレドニゾン、プレドニゾロン、デキサメタゾン等、ビスホスホネート等の薬剤を含んでもよい。潜在的に好適なビスホスホネートの例は、パミドロネート（Ａｒｅｄｉａ（登録商標））、ゾレドロン酸（Ｚｏｍｅｔａ（登録商標））、クロドロネート（Ｂｏｎｅｆｏｓ（登録商標））、リセンドロネート（Ａｃｔｏｎｅｌ（登録商標））、イバンドロネート（Ｂｏｎｉｖａ（登録商標））、エチドロネート（Ｄｉｄｒｏｎｅｌ（登録商標））、アレンドロネート（Ｆｏｓａｍａｘ（登録商標））、チルドロネート（Ｓｋｅｌｉｄ（登録商標））、インカドロネート（Ｙａｍａｎｏｕｃｈｉ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ）及びミノドロネート（ＹＭ５２９、Ｙａｍａｎｏｕｃｈｉ）である。

0092

例示的な化学療法剤は、コロニー刺激因子を含む。好適なコロニー刺激因子の例は、フィルグラスチム（Ｎｅｕｐｏｇｅｎ（登録商標））及びペグフィルグラスチム（Ｎｅｕｌａｓｔａ（登録商標））等の顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、ならびにサルグラモスチム（Ｌｅｕｋｉｎｅ（登録商標））等の顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）である。

0093

例示的な化学療法剤は、赤血球造血剤を含む。好適な赤血球造血剤の例は、エポエチンアルファ（例えば、Ｐｒｏｃｒｉｔ（登録商標）、Ｅｐｏｇｅｎ（登録商標）、及びＥｐｒｅｘ（登録商標））及びエポエチンベータ（例えば、ＮｅｏＲｅｃｏｒｍｏｎ（登録商標））等のエリスロポエチン（ＥＰＯ）、ならびに赤血球生成促進タンパク質（例えば、Ａｒａｎｅｓｐ（登録商標））である。

0094

例示的な化学療法剤は、抗アネルギー剤（例えば、腫瘍及び癌抗原に対する寛容性を破壊する小分子化合物、タンパク質、糖タンパク質、又は抗体）を含む。

0095

例示的な化学療法剤は、ウイルス、ウイルスタンパク質等を含む。通常、インビボで１回又はほんの数回の複製が可能であり、かつ腫瘍細胞に標的化される複製欠損ウイルスが、例えば、そのような組成物及び方法の有用な構成要素であり得る。そのようなウイルス剤は、ＧＭ−ＣＳＦ及び／又はＩＬ−２等の免疫刺激物質をコードする核酸を含み得るか、又はそれと関連し得る。天然の腫瘍溶解性ウイルス及びそのような組換え型腫瘍溶解性ウイルス（例えば、ＨＳＶ−１ウイルス、レオウイルス、複製欠損及び複製感受性アデノウイルス等）の両方が、そのような方法及び組成物の有用な構成要素であり得る。

0096

別の態様によれば、医薬組成物は、ステロイド性薬物及びＮＳＡＩＤ（非ステロイド性抗炎症薬）から選択され得る抗炎症剤を含んでもよい。他の抗炎症剤は、アスピリン及び他のサリチル酸塩、Ｃｏｘ−２阻害剤（ロフェコキシブ及びセレコキシブ等）、ＮＳＡＩＤ（イブプロフェン、フェノプロフェン、ナプロキセン、スリンダック、ジクロフェナック、ピロキシカム、ケトプロフェン、ジフルニサル、ナブメトン、エトドラック、オキサプロジン、及びインドメタシン等）、抗ＩＬ６Ｒ抗体、抗ＩＬ８抗体、抗ＩＬ１５抗体、抗ＩＬ１５Ｒ抗体、抗ＣＤ４抗体、抗ＣＤ１１ａ抗体（例えば、エファリズマブ）、抗α４／β−１インテグリン（ＶＬＡ４）抗体（例えば、ナタリズマブ）、炎症性疾患の治療のためのＣＴＬＡ４−１ｇ、プレドニゾロン、プレドニゾン、メトトレキサート等の疾患修飾抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）、スルファサラジン、ピリミジン合成阻害剤（レフルノミド等）、ＩＬ−１受容体遮断薬（アナキンラ等）、ＴＮＦ−α遮断薬（エタネルセプト、インフリキシマブ、及びアダリムマブ等）ならびに類似の薬剤から選択されてもよい。

0097

別の態様によれば、医薬組成物は、それを必要とする対象に対する少なくとも１つの免疫抑制剤及び／又は免疫調節剤を含み得る。免疫抑制剤及び／又は免疫調節剤の例として、シクロスポリン、アザチオプリン、ミコフェノール酸、ミコフェノレートモフェチル、プレドニゾン等のコルチコステロイド、メトトレキサート、金塩、スルファサラジン、抗マラリア薬、ブレキナール、レフルノミド、ミゾリビン、１５−デオキシスペルグアリン、６−メルカプトプリン、シクロホスファミド、ラパマイシン、タクロリムス（ＦＫ−５０６）、ＯＫＴ３、抗胸腺細胞グロブリン、チモペンチン、チモシン−α及び類似の薬剤が挙げられる。

0098

追加の免疫抑制剤及び／又は免疫調節剤は、ＩＬ−２受容体のｐ７５に結合する抗体、又は例えば、ＭＨＣ、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ７、ＣＤ２８、Ｂ７、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＩＦＮγ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６Ｒ、ＩＬ−６；ＩＧＦ、ＩＧＦＲ１、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１０、ＣＤ１１ａ、もしくはＣＤ５８に結合する抗体、又はそれらのリガンドに結合する抗体等の免疫抑制抗体から選択されてもよい。さらなる免疫抑制剤及び／又は免疫調節剤は、可溶性ＩＬ−１５Ｒ、ＩＬ−１０、Ｂ７分子（Ｂ７−１、Ｂ７−２、その変異体、及びその断片、ＩＣＯＳ、ならびにＯＸ４０、陰性Ｔ細胞調節因子の阻害剤（ＣＴＬＡ４に対する抗体等）ならびに類似の薬剤から選択されてもよい。

0099

本発明の特定の態様によれば、１つ以上の治療薬は、抗骨髄腫剤を含む。例示的な抗骨髄腫剤は、デキサメタゾン、メルファラン、ドキソルビシン、ボルテゾミブ、レナリドミド、プレドニゾン、カルムスチン、エトポシド、シスプラチン、ビンクリスチン、シクロホスファミド、シスプラチン、及びサリドマイドを含み、それらのうちのいくつかは、化学療法剤、抗炎症剤、又は免疫抑制剤として上に示される。

0100

本発明の特定の態様によれば、医薬組成物は、ＣＤ３８のエピトープに対する非放射標識モノクローナル抗体を更に含み得る。非放射標識モノクローナル抗体は、ダラツムマブ、ＭＯＲ２０２、又はＳＡＲ６５０９８４を含む。非放射標識モノクローナル抗体は、アクチニウム標識モノクローナル抗体と同じＣＤ３８のエピトープに対するものであってもよい。医薬組成物に含まれる非放射標識抗ＣＤ３８の量は、治療される疾患の正確な性質、患者の年齢及び体重、ＣＤ３８に対するモノクローナル抗体の同一性、ならびにモノクローナル抗体の標識のために選択される放射性核種に応じて変化し得る。

0101

本発明の特定の態様によれば、医薬組成物は、医薬組成物中の放射標識抗ＣＤ３８の量と少なくとも等しい量の、又は医薬組成物中の放射標識抗ＣＤ３８の量よりも少なくとも２倍多い、例えば、少なくとも４倍多い、又は少なくとも１０倍多い量の、非放射標識モノクローナル抗体を含み得る。

0102

本発明の特定の態様によれば、放射標識抗ＣＤ３８は、０．１ｕｇ／ｍｌ以下、例えば０．０６ｕｇ／ｍｌ以下、又は０．０４ｕｇ／ｍｌ以下、又は更には０．０２ｕｇ／ｍｌ以下で、本明細書に詳述される組成物又は医薬組成物中に含まれ得る。

0103

そのような用量に含まれる場合、本明細書に詳述される組成物又は医薬組成物は、投与から７２時間以内にリンパ芽球もしくは骨髄腫細胞の５０％超の細胞死、又は投与から９６時間以内にリンパ芽球もしくは骨髄腫細胞の７０％の細胞死、又は投与から９６時間以内にリンパ芽球もしくは骨髄腫細胞の９０％の細胞死、又は更には投与から９６時間以内にリンパ芽球もしくは骨髄腫細胞の９５％の細胞死を引き起こし得る。

0104

本発明の特定の態様によれば、アクチニウム標識モノクローナル抗体は、リンパ芽球もしくは骨髄腫細胞の細胞死を引き起こす際に対照モノクローナル抗体と比較して少なくとも５倍より有効であり得、対照モノクローナル抗体は、アクチニウム標識モノクローナル抗体と同じＣＤ３８のエピトープに対する非標識モノクローナル抗体を含む。例えば、アクチニウム標識モノクローナル抗体は、リンパ芽球もしくは骨髄腫細胞の細胞死を引き起こす際に対照モノクローナル抗体と比較して少なくとも１０倍より有効、少なくとも２０倍より有効、少なくとも５０倍より有効、又は少なくとも１００倍より有効であり得る。

0105

現在市販されている非標識抗ＣＤ３８治療薬Ｄａｒｚａｌｅｘ（登録商標）を用いるＣＤＣ及びＣＤＣＣによる最大溶解は、それぞれ１ｕｇ／ｍｌ及び０．１０ｕｇ／ｍｌで起こると文献に報告されている。上述のように、アクチニウム標識モノクローナル抗体は、細胞死を引き起こす際に少なくとも５倍より有効であり得る。理論に束縛されることを望むものではないが、放射標識抗ＣＤ３８の細胞傷害性におけるそのような増加は、例えば、アポトーシス等の追加の機序を介した細胞死を含み得る。

0106

本発明の医薬組成物は、血液悪性腫瘍を治療するため、又はＣＤ３８を発現する細胞の成長及び／もしくは増殖を阻害するため、又はＣＤ３８を発現する細胞に関与する疾患もしくは障害を治療するために使用され得る。したがって、本発明は、血液悪性腫瘍を有する対象を治療するための方法、ＣＤ３８を発現する細胞の成長及び／又は増殖を阻害するための方法、ならびにＣＤ３８を発現する細胞に関与する疾患又は障害を治療するための方法を提供し、該方法は、本明細書中上記に詳述される医薬組成物を対象に投与することを含む。

0107

本発明の特定の態様によれば、血液悪性腫瘍は多発性骨髄腫である。本発明の特定の態様によれば、ＣＤ３８を発現する細胞は多発性骨髄腫細胞である。本発明の特定の態様によれば、疾患又は障害は多発性骨髄腫であり得る。

0108

本発明の特定の態様によれば、ＣＤ３８を発現する細胞は、ＣＤ３８発現癌細胞又はＣＤ３８発現Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、もしくは形質細胞である。本発明の特定の態様によれば、ＣＤ３８ ＣＤ３８を発現する細胞は、固形腫瘍細胞又は血液悪性腫瘍細胞を含む。例示的な血液悪性腫瘍細胞は、多発性骨髄腫細胞、急性リンパ性白血病細胞、急性骨髄性白血病細胞、慢性リンパ性白血病細胞、慢性骨髄性白血病細胞、ホジキンリンパ腫細胞、非ホジキンリンパ腫細胞、Ｔ−ＬＧＬ白血病細胞、ＮＫ細胞白血病細胞、又はヘアリーセル白血病細胞を含む。

0109

上述のように、医薬組成物は、単独で、又は１つ以上の追加の治療薬と組み合わせてのいずれかで投与されてもよい。医薬組成物は、１つ以上の追加の治療薬を含み得る。医薬組成物は、少なくとも１回の用量を含む投与計画において投与され得る。

0110

本発明の特定の態様によれば、投与計画の少なくとも１回の用量は、対照モノクローナル抗体のみを含む投与計画の用量よりも５倍低いＣＤ３８に対するモノクローナル抗体の量を含む。本発明の特定の態様によれば、投与計画の少なくとも１回の用量は、対照モノクローナル抗体のみを含む投与計画の用量よりも１０倍低いＣＤ３８に対するモノクローナル抗体の量を含む。本発明の特定の態様によれば、投与計画の少なくとも１回の用量は、対照モノクローナル抗体のみを含む投与計画の用量よりも２０倍低いＣＤ３８に対するモノクローナル抗体の量を含む。本発明の特定の態様によれば、投与計画の少なくとも１回の用量は、対照モノクローナル抗体のみを含む投与計画の用量よりも５０倍低いＣＤ３８に対するモノクローナル抗体の量を含む。本発明の特定の態様によれば、投与計画の少なくとも１回の用量は、対照モノクローナル抗体のみを含む投与計画の用量よりも１００倍低いＣＤ３８に対するモノクローナル抗体の量を含む。対照モノクローナル抗体は、通常、アクチニウム標識モノクローナル抗体と同じＣＤ３８のエピトープに対する非標識モノクローナル抗体を含む。

0111

本発明の特定の態様によれば、投与計画は、対照投与計画よりも少なくとも１回のより少ない用量を含み、対照投与計画は、単独で、又は１つ以上の追加の治療薬と組み合わせてのいずれかで、アクチニウム標識モノクローナル抗体と同じＣＤ３８のエピトープに対する非標識モノクローナル抗体の投与を含む。本発明の特定の態様によれば、投与計画は、対照投与計画よりも少なくとも２回のより少ない用量を含み、対照投与計画は、単独で、又は１つ以上の追加の治療薬と組み合わせてのいずれかで、アクチニウム標識モノクローナル抗体と同じＣＤ３８のエピトープに対する非標識モノクローナル抗体の投与を含む。

0112

本発明の特定の態様によれば、投与計画は、対照投与計画よりも１０％少ない用量、例えば、対照投与計画よりも２０％少ない用量、又は３０％少ない用量、又は４０％少ない用量、又は５０％少ない用量、又は６０％少ない用量、又は７０％少ない用量、又は８０％少ない用量、又は更には９０％少ない用量を含み得る。

0113

本発明の特定の態様によれば、対照モノクローナル抗体は、約１６ｍｇ／ｋｇ患者体重の用量で投与されるダラツムマブを含み得る。本発明の特定の態様によれば、対照投与計画は、少なくとも８週間、１週間当たり１回の用量で投与される８回の用量を含み得る。

0114

本発明の特定の態様によれば、放射標識抗ＣＤ３８抗体の治療有効用量は、０．１ｕｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇ、例えば、１ｕｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇ、又は１０ｕｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇ、又は１００ｕｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇ、又は０．１ｕｇ／ｋｇ〜１００ｕｇ／ｋｇ、又は０．１ｕｇ／ｋｇ〜５０ｕｇ／ｋｇ、又は０．１ｕｇ／ｋｇ〜１０ｕｇ／ｋｇ、又は０．１ｕｇ／ｋｇ〜４０ｕｇ／ｋｇ、又は１ｕｇ／ｋｇ〜４０ｕｇ／ｋｇであり得る。

0115

これらのタンパク質用量は、０．１ｕＣｉ／ｋｇ〜５ｕＣｉ／ｋｇ、例えば、０．１ｕＣｉ／ｋｇ〜４ｕＣｉ／ｋｇ、又は０．１ｕＣｉ／ｋｇ〜３ｕＣｉ／ｋｇ、又は０．１ｕＣｉ／ｋｇ〜２ｕＣｉ／ｋｇ、又は０．１ｕＣｉ／ｋｇ〜１ｕＣｉ／ｋｇ、又は０．２ｕＣｉ／ｋｇ〜５ｕＣｉ／ｋｇ、又は０．５ｕＣｉ／ｋｇ〜５ｕＣｉ／ｋｇの放射能濃度を含み得る。

0116

放射標識抗ＣＤ３８抗体の治療有効用量は、単回用量で、又は２回の等しい分割用量として投与されてもよく、第２の用量は、第１の用量の１日〜１０日後、例えば、３〜８日又は４〜７日又は５〜８日後に投与されてもよい。

0117

一態様によれば、本発明は、対象における癌を治療するための方法を提供し、該方法は、治療有効量の本明細書中上記に詳述される医薬組成物を対象に投与することを含む。いずれか特定の理論に束縛されることを望むものではないが、ダラツムマブ、ＭＯＲ２０２、又はＳＡＲ６５０９８４等の本明細書に記載される抗ＣＤ３８モノクローナル抗体で観察された免疫調節効果に基づいて、固形腫瘍の治療に有効であり得る。したがって、本発明は、固形腫瘍を有する患者を治療する方法であって、それを必要とする患者に固形腫瘍を治療するのに十分な時間、ＣＤ３８に特異的に結合する治療有効量の抗体を投与することを含む方法も提供する。

0118

特定の態様によれば、本発明は製造品を提供する。例えば、本発明の態様による製造品は、（ａ）ＣＤ３８に対する放射標識モノクローナル抗体と、（ｂ）ＣＤ３８を発現する細胞に関与する疾患又は障害を治療するのに有効な量の抗体を対象に投与するよう使用者に指示する表示とを含み得る。モノクローナル抗体は、本明細書に記載される抗体のいずれかを含んでもよく、本明細書に記載される放射性核種のいずれかで標識されてもよい。例えば、モノクローナル抗体は、ダラツムマブ、ＭＯＲ２０２、又はＳＡＲ６５０９８４のいずれかであってもよい。本発明の一態様によれば、製造品は、アクチニウム（225Ａｃ）で標識されたダラツムマブを含み得る。製造品のさらなる態様によればＣＤ３８を発現する細胞に関与する疾患又は障害を治療するのに有効な抗体の量は、１０μＣｉ〜６００μＣｉの225Ａｃ標識ダラツムマブ、例えば、１０μＣｉ〜４００μＣｉの225Ａｃ標識ダラツムマブ、又は１０μＣｉ〜２００μＣｉの225Ａｃ標識ダラツムマブを含む。

0119

本発明の特定の態様によれば、製造品は、（ａ）本明細書に記載される態様のいずれかによる医薬組成物と、（ｂ）ＣＤ３８を発現する細胞に関与する疾患又は障害を治療するのに有効な量の抗体を対象に投与するよう使用者に指示する表示とを含み得る。例えば、医薬組成物は、ＣＤ３８に対するモノクローナル抗体の放射標識画分、及びＣＤ３８に対する同じ又は異なるモノクローナル抗体の非標識画分を含み得る。医薬組成物は、患者に特化した形態で、例えば、特定の患者のために（例えば、体重、性別、年齢、疾患の種類及び進行等の患者の特徴に基づいて）調整された放射活性の量及びタンパク質濃度を含む治療有効用量で提供され得る。特定の態様によれば、治療有効用量は、０．１ｕＣｉ／ｋｇ〜５ｕＣｉ／ｋｇ、例えば、０．１ｕＣｉ／ｋｇ〜４ｕＣｉ／ｋｇ、又は０．１ｕＣｉ／ｋｇ〜３ｕＣｉ／ｋｇ、又は０．１ｕＣｉ／ｋｇ〜２ｕＣｉ／ｋｇ、又は０．１ｕＣｉ／ｋｇ〜１ｕＣｉ／ｋｇ、又は０．２ｕＣｉ／ｋｇ〜５ｕＣｉ／ｋｇ、又は０．５ｕＣｉ／ｋｇ〜５ｕＣｉ／ｋｇの放射能濃度を有する、０．１ｕｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇ、例えば、１ｕｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇ、又は１０ｕｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇ、又は１００ｕｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇ、又は０．１ｕｇ／ｋｇ〜１００ｕｇ／ｋｇ、又は０．１ｕｇ／ｋｇ〜５０ｕｇ／ｋｇ、又は０．１ｕｇ／ｋｇ〜１０ｕｇ／ｋｇ、又は０．１ｕｇ／ｋｇ〜４０ｕｇ／ｋｇ、又は１ｕｇ／ｋｇ〜４０ｕｇ／ｋｇの放射標識抗ＣＤ３８抗体を含み得る。

0120

特定の態様によれば、本発明は、ＣＤ３８を発現する細胞に関与する疾患又は障害の治療に有用な医薬組成物を提供する。組成物は、５〜５０重量％のアクチニウム（225Ａｃ）で標識されたＣＤ３８標識に対するモノクローナル抗体と、５０〜９５重量％の非標識ＣＤ３８に対するモノクローナル抗体と、薬学的に許容可能な担体と、を含み得る。医薬組成物のさらなる態様によれば、放射標識モノクローナル抗体は225Ａｃ−ダラツムマブであってもよく、非標識モノクローナル抗体は、ダラツムマブ等の標識抗体と同じであってもよいか、又は異なってもよい。

0121

実施例１：ダラツムマブの放射標識
Ｊａｎｓｓｅｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ（ＵＳＡ）社製のダラツムマブ（ＤＡＲＡ）を、Ｍｏｎｔｅｆｉｏｒｅ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｅｎｔｅｒ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＵＳＡの薬局から購入した。アイソタイプ対照ヒトＩｇＧ１は、Ｃｒｅａｔｉｖｅ Ｄｉａｇｎｏｔｉｃｓ（Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＵＳＡ））から購入した。乾燥硝酸塩の形態の225ＡＣは、Ｏａｋ Ｒｉｄｇｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，ＵＳＡから入手した。塩化インジウム111の形態のインジウム−１１１（111Ｉｎ）は、ＭＤＳ Ｎｏｒｄｉｏｎ（Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ，ＢＣ，Ｃａｎａｄａ）から購入した。ＣＤ３８陽性リンパ腫細胞株Ｄａｕｄｉは、ＡＴＣＣ（Ｍａｎａｓｓａｓ，ＵＳＡ）から調達し、ＣＤ３８陽性多発性骨髄腫細胞株ＫＭＳ−２８ＢＭ及びＫＭＳ−２８ＰＥはＸｅｎｏＴｅｃｈ（Ｊａｐａｎ）から調達した。Ｄａｕｄｉ細胞株は、ＲＰＭＩ、１０％ＦＢＳ及び抗菌薬カクテルで成長させ、ＫＭＳ−２８ＢＭ及びＫＭＳ−２８ＰＥ細胞株は、１０％ＦＢＳを補充したＲＰＭＩで成長させた。二官能性キレート剤ｐ−ＳＣＮ−Ｂｎ−ＤＯＴＡ（これらの実施例ではＤＯＴＡと称される）をＭａｃｒｏｃｙｃｌｉｃｓ（Ｔｅｘａｓ，ＵＳＡ）から購入した。

0122

図１Ａ及び図１Ｂを参照すると、酢酸アンモニウム緩衝液中、３７℃で１．５時間、５Ｍ過剰でＤＯＴＡをＤＡＲＡにコンジュゲートした（（図１Ａ）。ＤＡＲＡ−ＤＯＴＡコンジュゲートを４００ｎＣｉ〜０．３μｇの比放射能の225Ａｃ又は111Ｉｎで標識して225Ａｃ−ＤＡＲＡを生成した（図１Ｂ）。225Ａｃ−ＤＡＲＡを等しい量の非標識ＤＡＲＡで希釈して、２００ｕＣｉの225Ａｃ−ＤＡＲＡ用量になるように総抗体用量（０．３μｇ）を調節した。その後、使い捨てのスピンカラムで試料を９９±１の放射化学的純度まで精製した。

0123

図２は、ＤＯＴＡ−ＤＡＲＡ免疫複合体による225Ａｃのキレート化の程度を示す棒グラフを提供し、コンジュゲーション反応は、３７oＣ又は室温で、ＤＡＲＡに対して様々なモル過剰のＤＯＴＡキレーターで行った。０．１５Ｍ酢酸アンモニウム緩衝液（Ｐｈ６．５）中０．３ｍｇ／ｍｌのＤＯＴＡ−ＤＡＲＡ免疫複合体を、３７oＣ又は室温で６０分間、１ｕＣｉ／ｕｇダラツムマブで、０．０１Ｍ ＨＣＬ中の225Ａｃで標識した（ＤＯＴＡによる225Ａｃのキレート化）。

0124

225ＡＣ−ＤＡＲＡの安定性は、２つの異なる温度で保存して測定した。図３Ａは、様々な225Ａｃ−ＤＡＲＡ試料の４oＣでの保存安定性を示しており、試料は、３７oＣ又は室温で、ＤＡＲＡに対して様々なモル過剰のＤＯＴＡで行われたＤＯＴＡとＤＡＲＡとのコンジュゲーション反応に由来する。図３Ｂは、様々な225Ａｃ−ＤＡＲＡ試料の室温での保存安定性を示しており、試料は、３７oＣ又は室温で、ＤＡＲＡに対して様々なモル過剰のＤＯＴＡで行われたＤＯＴＡとＤＡＲＡとのコンジュゲーション反応に由来する。安定性実験の開始前に、使い捨てのスピンカラムで試料を９９±１％まで精製した。両方の温度で、アクチニウム標識モノクローナル抗体の７５％超が、４oＣで２４時間保存した後にインタクトな状態を保持し、アクチニウム標識モノクローナル抗体の６０％超が、室温で２４時間保存した後にインタクトな状態を保持する。

0125

実施例２：225Ａｃ−ＤＡＲＡの免疫反応性
図４Ａに示されるように、たとえ、３７oＣ又は室温で、ＤＡＲＡに対して様々なモル過剰のＤＯＴＡで行われたＤＯＴＡとＤＡＲＡとのコンジュゲーション反応由来の225Ａｃ−ＤＡＲＡコンジュゲートであっても、様々な濃度のＣＤ３８に対する225Ａｃ−ＤＡＲＡコンジュゲートの結合は、非標識抗ＣＤ３８と比較して本質的に変化しない。

0126

ＤＡＲＡ及びＤＯＴＡとコンジュゲートさせたダラツムマブに対する補体成分１ｑ（Ｃ１ｑ）の結合を、ＥＬＩＳＡ結合アッセイを用いて評価した。図４Ｂに示されるように、ＤＡＲＡのＤＯＴＡへのコンジュゲーションは、補体結合に影響を与えない。高結合型９６ウェルプレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）を、コーティング緩衝液（１００Ｍｍ炭酸ナトリウム、ｐＨ９．６）中の様々な濃度の抗体で、一晩４℃でコーティングした。各インキュベーション後に、試料ウェルをＰＢＳＴ（０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０／ＰＢＳ、ｐＨ７．４）で３回洗浄した。コーティング後、ブロッキング緩衝液（０．１％ＢＳＡ／ＰＢＳＴ）でプレートを室温で１時間ブロッキングし、次いでブロッキング緩衝液中の２μｇ／ｍＬヒトＣ１ｑと交換した。１時間後、ウェルを３回洗浄し、ブロッキング緩衝液中の１００μＬの１μｇ／ｍＬ抗ｈＣ１ｑＨＲＰを添加した。１時間後にウェルを洗浄し、１００μＬのＴＭＢ基質（Ｐｉｅｒｃｅ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）を添加した。１５分後、１００μＬの１Ｍ ＨＣｌで反応を停止させ、Ｓｐｅｃｔｒａ ＭＡＸ ２５０プレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ、Ｓａｎ Ｊｏｓｅ，ＣＡ）を用いて４５０ｎｍで吸光度を読み取った。

0127

ＤＡＲＡ及びＤＯＴＡとコンジュゲートさせたＤＡＲＡがＡＤＣＣを媒介する能力を、Ｐｒｏｍｅｇａ（Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）から購入され、製造業者のプロトコルに従って使用されるＡＤＣＣ Ｒｅｐｏｒｔｅｒ Ｂｉｏａｓｓａｙ，Ｃｏｍｐｌｅｔｅ Ｋｉｔ（Ｒａｊｉ）を使用して評価した。図４Ｃに示されるように、様々な濃度のＤＡＲＡ及びＤＡＲＡ−ＤＯＴＡを、ＣＤ３８を発現する標的細胞に添加した。ＦｃγＲ（ＩＩＩ）によって活性化されたときにルシフェラーゼを発現するエフェクター細胞を標的細胞に添加し、Ｂｉｏ−Ｇｌｏｗ（商標）の添加後に発光を測定した。誘導倍率＝ＲＬＵ（誘導バックグラウンド）／ＲＬＵ（抗体なしの対照バックグラウンド）。ＡＤＣＣを活性化することが分かっている抗ＣＤ２０抗体を、陽性対照として使用した。示されるように、ＤＡＲＡのＤＯＴＡへのコンジュゲーションは、ＡＤＣＣを阻害しない。

0128

実施例３：225Ａｃ−ＤＡＲＡの細胞傷害性
裸のＤＡＲＡ、225Ａｃ−ＤＡＲＡ、及び無関係なＩｇＧ−225Ａｃが、ある範囲のＣＤ３８抗原発現レベルを有する多発性骨髄腫細胞株において細胞溶解を誘導する能力を、様々な時点及び濃度で評価した。

0129

Ｄａｕｄｉ細胞（１ｍＬＰＢＳ中２×１０5）をＢＳＡでブロックしたエッペンドルフ管に入れ、225ＡＣ−ＤＡＲＡ、又は対応する活性の対照ヒトＩｇＧ、又は非標識ＤＡＲＡを用いて、０、２０、４０、６０及び１００ｎＣｉ／試料で３通りに処理した。１ｍＬの試料当たりのＤＡＲＡの総量は、２０ｎＣｉ試料で０．０２μｇ、４０ｎＣｉ試料で０．０４μｇ、６０ｎＣｉ試料及び対応する非標識ＤＡＲＡの試料で０．０６μｇであった。４８、７２、及び９６時間のインキュベーション後、放射標識抗体が細胞に与える影響を、テトラゾリウム染料（２，３）−ビス−（２−メトキシ−４−ニトロ−５−スルフェニル）−（２Ｈ）−タラゾリウム−５−カルボキサニリド（ＸＴＴ）アッセイを用いて評価した。ウェルを洗浄し、新鮮な培地を、ＰＢＳ中１ｍｇ／Ｍｌの５０μｌ ＸＴＴ（Ｓｉｇｍａ）、及びアセトン中１Ｍｍの４μｌメナジオン（Ｓｉｇｍａ）とともに添加した。細胞を更に３時間インキュベートし、４９２ｎｍで吸光度を読み取った。全ての条件を３通り行った。平行して、トリパンブルー染色で死滅を評価した。

0130

図５Ａ〜図５Ｄに、Ｄａｕｄｉ細胞を225Ａｃ−ＤＡＲＡコンジュゲートで処理したＸＴＴアッセイの結果を示す。225Ａｃ−ＤＯＴＡ−ＩｇＧコンジュゲートによるＤａｕｄｉ細胞の溶解が９５％〜１００％に達するのに対し、対照ＤＡＲＡは、本アッセイで試験した低濃度ではほとんど又は全く効果を示さないこと（すなわち、対照細胞と同じ細胞傷害性）が見て取れる。図５Ａ〜図５Ｄは、２４、４８、７２、及び９６時間の曝露時間をそれぞれ示す。

0131

図６は、図５Ａ〜図５Ｄに見られるデータの概要グラフを提供し、様々な濃度の225Ａｃ−ＤＡＲＡについて経時的な細胞溶解パーセントを示す。図７Ａ及び図７Ｂは、様々な濃度の225Ａｃ−ＤＡＲＡコンジュゲートが、９６時間にわたってＡＤＣＣによる２８ＢＭ及び２８ＰＥ多発性骨髄腫細胞の溶解をそれぞれ誘導する能力を示すグラフを提供する。

0132

図８Ａ〜図８Ｃは、様々な濃度の225Ａｃ−ＤＡＲＡコンジュゲートへの曝露におけるＤａｕｄｉ、２８ＢＭ、及び２８ＰＥ細胞の細胞溶解結果を比較する棒グラフを提供し、パネル図８Ａ〜図８Ｃは、４８、７２、及び９６時間の曝露時間をそれぞれ示す。

0133

重要なのは、ＤＯＴＡ及び225ＡｃでＤＡＲＡを標識した際に免疫原性が保持されたことである。図中に示されるように、０．０１μｇ／Ｍｌ〜０．０６μｇ／Ｍｌの範囲の抗体及び225Ａｃ標識構築物の濃度を、４個の細胞株のそれぞれにおいて試験した。用いられた活性：抗体の比率は、１０ｎＣｉ：０．０１μｇ／ｍＬであった。０．０１μｇ／ｍＬ及び０．０６μｇ／ｍＬの225Ａｃ−ＤＡＲＡでＤａｕｄｉ細胞を処理したところ、７２時間でそれぞれ２５％及び９５％の細胞死がもたらされたのに対し、ダラツムマブのみの群では細胞死は５〜６％であった。同様の時間依存性及び濃度依存性の細胞死が、患者由来細胞株２８ＰＥ及び２８ＢＭにおいて示された。ＣＤ３８陽性細胞株を、同様の活性の放射標識アイソタイプ一致ヒト対照抗体ＩｇＧ−225Ａｃで処理した場合、又は陰性のＣＤ３８発現多発性骨髄腫細胞株Ｕ２６６を225Ａｃ−ＤＡＲＡで処理した場合には、時間依存性又は濃度依存性の死滅は観察されなかった。

0134

これらの結果は、ＣＤ３８を標的とする抗体を225Ａｃで標識する能力を示すものであり、強力なα放射体225ＡＣは、ＤＡＲＡの免疫機能を依然として維持しながらビヒクルとして抗体を本質的に利用して、ＤＡＲＡの有効性を１０倍超改善する。225ＡＣは、その高い線形エネルギー移動特性及び組織における短い経路長に起因して有効なペイロードである。

0135

実施例４：動物モデル
Ｄａｕｄｉ腫瘍担持マウスにおいて111Ｉｎ−ＤＡＲＡのｍｉｃｒｏＳＰＥＣＴ／ＣＴによる画像化を行い、腫瘍におけるその特異的取り込みを確認した（図９）。腫瘍の誘発のために、雌ＳＣＩＤマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから調達したＣＢ１７／Ｉｃｒ−Ｐｒｋｄｃscid／ＩｃｒＩｃｏＣｒｌ）の右側腹部に、５０μＬ生理食塩水中の５×１０6Ｄａｕｄｉ細胞を皮下注射した。腫瘍の成長を３日ごとに電子キャリパーで測定し、式Ｖ＝０．５（Ｌ×Ｗ2）を用いて腫瘍体積を算出し、幅を腫瘍短径とした。腫瘍細胞接種後１４日目に、腫瘍が約２００ｍｍ3の平均体積に達したとき、マウスをｍｉｃｒｏＳＰＥＣＴ／ＣＴにより撮像したか、又は111Ｉｎ−ＤＡＲＡで処理した。画像化のために、３匹のマウスに４００μＣｉの111Ｉｎ−ＤＡＲＡを腹腔内（ＩＰ）注射し、注射後１、４、２４時間、続いて２、３、７及び１０日目にｍｉｃｒｏＳＰＥＣＴ／ＣＴ（ＭＩＬａｂｓ，Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）で撮像した。

0136

ＭｉｃｒｏＳＰＥＣＴ／ＣＴ画像は、投与後２４時間の腫瘍において111Ｉｎ−ＤＡＲＡの顕著な局所化を示した。111ＤＡＲＡは最長１０日間腫瘍内で濃縮し続けたが、一方で、活性は体の他の部分から消失した。図９は、全時間経過にわたって１匹のマウスからの代表的な画像を示している。

0137

放射免疫療法（ＲＩＴ）の副作用を評価するために、腫瘍担持マウスを５匹の動物の群に無作為化し、１００μＬの生理食塩水、又はマウス１匹当たり１０もしくは０．３μｇの濃度の非標識ＤＡＲＡ、又は０．３μｇの抗体当たり４００ｎＣｉ及び２００ｎＣｉの225Ａｃ−ＤＡＲＡのいずれかをＩＰ注射した。マウスを４０日間腫瘍進行について観察し、腫瘍が４，０００ｍｍ3の体積に達した、又は壊死を起こしたいずれのマウスも人道的に安楽死させた（図１０Ａ及び図１０Ｂ）。

0138

ＲＩＴの副作用を評価するために、マウスの体重をモニタリングして（図１１Ａ）、血液学的パラメータ及び全身毒性（腎臓及び肝臓、図１１Ｂ）を評価することにより、225Ａｃ−ＤＡＲＡの総合的な安全性評価を行った。２００ｎＣｉの225Ａｃ−ＤＡＲＡ群におけるマウスの体重は実験を通して変化しなかった一方で、４００ｎＣｉ群は、処理後２週目の間にわずかに一過性の体重減少を示し、処理後３週目には迅速な回復が認められた。血液学的パラメータ及び毒性パラメータの評価により、試験した任意のパラメータでは、いずれの225Ａｃ標識群と非標識群の間にも統計的有意差が見られなかったことが示された。このことは、225Ａｃコンジュゲートの存在が血液パラメータに影響を与えなかったこと、又は処理マウスにおいてアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）及びアラニントランスミナーゼ（ＡＬＴ）のレベルによって測定された肝障害の増加の証拠が見られないことを示唆するものであった。更に、クレアチニン及び血中尿素窒素（ＢＵＮ）に何の変化も見られなかったことから、明らかな腎毒性がないことが示された。

0139

本出願には、以下の態様が開示されている。

0140

態様１．ＣＤ３８を発現する細胞に関与する疾患又は障害を治療する方法であって、ＣＤ３８に対するモノクローナル抗体を含む有効量の医薬組成物を対象に投与することを含み、モノクローナル抗体はアクチニウム（225Ａｃ）で標識される、方法。

0141

態様２．モノクローナル抗体は、ＣＤ３８に対するヒト又はヒト化免疫グロブリン（ＩｇＧ１）を含む、態様１に記載の方法。

0142

態様３．モノクローナル抗体は、ダラツムマブ、ＭＯＲ２０２、ＳＡＲ６５０９８４を含む、態様１又は２に記載の方法。

0143

態様４．ＣＤ３８を発現する細胞は、ＣＤ３８発現癌細胞又はＣＤ３８発現Ｔ細胞、Ｂ細胞、ＮＫ細胞、もしくは形質細胞である、態様１〜３のいずれかに記載の方法。

0144

態様５．ＣＤ３８を発現する細胞は、固形腫瘍細胞又は血液悪性腫瘍細胞を含む、態様１〜４のいずれかに記載の方法。

0145

態様６．血液悪性腫瘍細胞は、多発性骨髄腫細胞、急性リンパ性白血病細胞、急性骨髄性白血病細胞、慢性リンパ性白血病細胞、慢性骨髄性白血病細胞、ホジキンリンパ腫細胞、非ホジキンリンパ腫細胞、Ｔ−ＬＧＬ白血病細胞、ＮＫ細胞白血病細胞、又はヘアリーセル白血病細胞を含む、態様５に記載の方法。

0146

態様７．医薬組成物は、ＣＤ３８のエピトープに対する非放射標識モノクローナル抗体を更に含む、態様１〜６のいずれかに記載の方法。

0147

態様８．医薬組成物は、アクチニウム標識モノクローナル抗体と同じＣＤ３８のエピトープに対する非放射標識モノクローナル抗体を更に含む、態様１〜７のいずれかに記載の方法。

0148

態様９．有効量は、０．１ｕＣｉ／ｋｇ〜５ｕＣｉ／ｋｇのアクチニウム（225Ａｃ）を含む０．１ｕｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇの抗体の用量；例えば、０．１ｕＣｉ／ｋｇ〜１ｕＣｉ／ｋｇを含む０．１ｕｇ／ｋｇ〜５０ｕｇ／ｋｇの抗体を含む、態様１〜８のいずれかに記載の方法。

0149

態様１０、有効量は、単回用量として投与されるか、又は有効量は、２回の等しい分割用量として投与され、第２の用量が第１の用量の３〜８日後に投与される、態様１〜９のいずれかに記載の方法。

0150

態様１１．１つ以上のさらなる治療薬を投与することを更に含む、態様１〜１０のいずれかに記載の方法。

0151

態様１２．１つ以上のさらなる治療薬の投与は、医薬組成物の投与の前又は後である、態様１１に記載の方法。

0152

態様１３．１つ以上のさらなる治療薬は、化学療法剤、抗炎症剤、免疫抑制剤、免疫調節剤、又はそれらの組み合わせを含む、態様１１又は１２のいずれかに記載の方法。

0153

態様１４．１つ以上のさらなる治療薬は、デキサメタゾン、メルファラン、ドキソルビシン、ボルテゾミブ、レナリドミド、プレドニゾン、カルムスチン、エトポシド、シスプラチン、ビンクリスチン、シクロホスファミド、及びサリドマイドなどの抗骨髄腫剤を含む、態様１１〜１３のいずれかに記載の方法。

0154

態様１５．医薬組成物は、１つ以上のさらなる治療薬を更に含む、態様１〜１４のいずれかに記載の方法。

0155

態様１６．医薬組成物は、少なくとも１回の用量を含む投与計画において対象に投与される、態様１〜１５のいずれかに記載の方法。

0156

態様１７．少なくとも１回の用量は、対照モノクローナル抗体のみを含む投与計画の用量よりも５倍低いＣＤ３８に対するモノクローナル抗体の量、又は対照モノクローナル抗体のみを含む投与計画の用量よりも１０倍低いＣＤ３８に対するモノクローナル抗体の量、又は対照モノクローナル抗体のみを含む投与計画の用量よりも２０倍低いＣＤ３８に対するモノクローナル抗体の量、又は対照モノクローナル抗体のみを含む投与計画の用量よりも５０倍低いＣＤ３８に対するモノクローナル抗体の量、又は対照モノクローナル抗体のみを含む投与計画の用量よりも１００倍低いＣＤ３８に対するモノクローナル抗体の量を含み、対照モノクローナル抗体は、アクチニウム標識モノクローナル抗体と同じＣＤ３８のエピトープに対する非標識モノクローナル抗体を含み、対照モノクローナル抗体は、約１６ｍｇ／ｋｇ患者体重の用量で投与されるダラツムマブを含む、態様１６に記載の方法。

0157

態様１８．投与計画は、対照投与計画よりも少なくとも１回少ない用量、又は対照投与計画よりも少なくとも２回少ない用量、又は対照投与計画よりも少なくとも３回少ない用量、又は対照投与計画よりも少なくとも４回少ない用量、又は対照投与計画よりも少なくとも５回少ない用量を含み、対照投与計画は、単独で又は１つ以上の追加の治療薬と組み合わせてのいずれかの、アクチニウム標識モノクローナル抗体と同じＣＤ３８のエピトープに対する非標識モノクローナル抗体の投与を含み、対照投与計画は、少なくとも８週間、１週間に１回の用量で投与される８回の用量を含む、態様１６又は１７に記載の方法。

0158

態様１９．（ａ）ＣＤ３８に対する放射標識モノクローナル抗体と、（ｂ）ＣＤ３８を発現する細胞に関与する疾患又は障害を治療するのに有効な量の抗体を対象に投与するよう使用者に指示する表示と、を含む、製造品。

0159

態様２０．ＣＤ３８を発現する細胞又は障害を治療するのに有効な抗体の患者特異的量を含む医薬組成物と、（ｂ）医薬組成物に関する情報を示す表示と、を含む、製造品。

0160

態様２１．モノクローナル抗体は、アクチニウム（225Ａｃ）で標識されたダラツムマブである、態様１９又は２０に記載の製造品。

0161

態様２２．ＣＤ３８を発現する細胞に関与する疾患又は障害を治療するのに有効な抗体の量は、１０μＣｉ〜６００μＣｉの225Ａｃ標識ダラツムマブ、例えば、１０μＣｉ〜４００μＣｉの225Ａｃ標識ダラツムマブ、又は１０μＣｉ〜２００μＣｉの225Ａｃ標識ダラツムマブを含む、態様１９〜２１のいずれかに記載の製造品。

0162

態様２３．ＣＤ３８を発現する細胞に関与する疾患又は障害を治療するのに有効な抗体の量は、０．１ｕＣｉ／ｋｇ〜５ｕＣｉ／ｋｇのアクチニウム（225Ａｃ）を含む０．１ｕｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇの抗体の用量；例えば、０．１ｕＣｉ／ｋｇ〜１ｕＣｉ／ｋｇを含む０．１ｕｇ／ｋｇ〜５０ｕｇ／ｋｇの抗体を含む、態様１９〜２２のいずれかに記載の製造品。

0163

態様２４．ＣＤ３８を発現する細胞に関与する疾患又は障害の治療に有用な医薬組成物であって、組成物は、５〜５０重量％のアクチニウム（225Ａｃ）で標識されたＣＤ３８標識に対するモノクローナル抗体と、５０〜９５重量％の非標識ＣＤ３８に対するモノクローナル抗体と、薬学的に許容可能な担体と、を含む、医薬組成物。

0164

態様２５．放射標識モノクローナル抗体は225Ａｃ−ダラツムマブであり、非標識モノクローナル抗体は、ダラツムマブ等の標識抗体と同じであってもよいか、又は異なってもよい、態様２２に記載の医薬組成物。

0165

態様２６．抗体の総量は、１０μＣｉ〜６００μＣｉの225Ａｃ標識ダラツムマブ、例えば、１０μＣｉ〜４００μＣｉの225Ａｃ標識ダラツムマブ、又は１０μＣｉ〜２００μＣｉの225Ａｃ標識ダラツムマブを含む、態様２５に記載の医薬組成物。

0166

態様２７．抗体の総量は、０．１ｕＣｉ／ｋｇ〜５ｕＣｉ／ｋｇのアクチニウム（225Ａｃ）を含む０．１ｕｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇの抗体の用量；例えば、０．１ｕＣｉ／ｋｇ〜１ｕＣｉ／ｋｇを含む０．１ｕｇ／ｋｇ〜５０ｕｇ／ｋｇの抗体を含む、態様２５又は２６のいずれかに記載の製造品。