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【課題】1本鎖DNA同士の連結効率を改善する【解決手段】受容側1本鎖DNAに対して予めターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ(TdT)を用いて数塩基のリボヌクレオチドを付加しておくことで、5′末端が予めリン酸化された供与側1本鎖DNA分子の受容側1本鎖DNAの3′末端に対するRNAリガーゼによる連結反応の効率を増強することが可能になる。